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背景类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是最为常见的致残性自身免疫病,近期研究发现辅助性T细胞(T helper cells,Th)17/调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)亚群失衡在RA发病机制及病情进展中具有重要作用。Th17和Treg细胞都属于CD4~+T淋巴细胞,Treg可以分泌转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)等抑制性细胞因子,具有免疫调节作用。Th17细胞具有白细胞介素(interleukin,IL)-23依赖性,分泌IL-17、IL-6等炎症性细胞因子,介导炎症反应。但Th17/Treg细胞及其相关细胞因子IL-17、IL-6、TGF-β、IL-23在RA中的具体变化趋势及临床意义目前尚不明确。目的通过检测RA患者外周血中Th17/Treg细胞表达率,及血清、关节液中相关细胞因子水平,比较其与正常对照(normal control, NC)组间的差异,分析其与疾病病程、病情活动、骨破坏及治疗情况等的关系,探讨Thl7/Treg及其细胞因子在RA疾病中的作用及其临床意义。方法收集2009年12月至2010年5月在安徽医科大学第一附属医院风湿免疫科住院的RA患者57例及年龄性别匹配的健康体检者32名,RA患者按照疾病病程、病情活动、骨破坏及治疗情况分组。流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中CD3~+CD8-IL-17+细胞(Th17)及CD3~+CD8-CD25+FoxP3+细胞(Treg)表达率,酶联免疫吸附剂测定(Enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)法检测血清及关节液中Th17/Treg相关细胞因子IL-17、IL-6、TGF-β及IL-23水平。比较RA患者关节液与对应血清中细胞因子水平有无差异,比较RA患者外周血Th17/Treg表达率及血清中相关细胞因子水平和NC组间有无差异,并分析其与RA患者临床及实验室指标的关系。结果1. Th17和Treg细胞表达及相关细胞因子水平比较:与NC组比较,RA组(n=57)外周血Th17细胞表达率及Th17/Treg比值明显升高(4.09%±1.85% vs2.32%±1.42%, P=0.000; 1.14±0.61 vs 0.34±0.17, P=0.000);Treg细胞表达率明显降低(3.92%±1.56% vs 7.04%±2.20%, P=0.000);血清中IL-17、IL-6、IL-23水平明显升高(P均<0.05),TGF-β水平无明显变化(P>0.05)。2. Th17/Treg与相关细胞因子的关联性:RA患者外周血中Th17细胞表达率及Th17/Treg比值与血清IL-17、IL-6、IL-23水平正相关(P均<0.05),与TGF-β无明显相关关系(P>0.05);Treg细胞表达率与血清中IL-17、IL-6、IL-23、TGF-β水平无明显相关性(P均>0.05);血清中IL-17、IL-6、IL-23水平互为正相关关系(P均<0.05),TGF-β与IL-17、IL-6、IL-23无明显相关性(P均>0.05)。3.关节液与血清中相关细胞因子比较:8例RA患者同时留取关节液和血清,关节液中IL-17水平较血清中升高(P<0.05),而IL-6、IL-23、TGF-β水平无明显变化(P均>0.05)。4. Th17/Treg与病程:RA早期组(病程≤2年,n=11)与非早期组(病程>2年,n=46)外周血Th17和Treg细胞表达率及Th17/Treg比值比较,差异无统计学意义(P均>0.05);RA非早期组血清IL-6和IL-23水平较早期组升高(P均<0.05),而IL-17和TGF-β水平无明显变化(P均>0.05)。5. Th17/Treg与病情活动:RA病情高度活动组(DAS28>5.1,n=42)较病情非高度活动组(DAS28≤5.1, n=15)Th17细胞表达率及Th17/Treg比值升高(P均<0.05),但Treg细胞表达率及血清中相关细胞因子水平无明显变化(P均>0.05);相关性分析显示Th17细胞表达率及Th17/Treg比值与28个关节压痛计数(TJC)、患者疼痛视觉模拟评分(VAS)、DAS28等病情活动指标正相关(P均<0.05),血清IL-6水平与患者疼痛VAS正相关(P<0.05),血清TGF-β水平与血沉负相关(P<0.05),而Treg细胞表达率与上述病情活动指标无明显相关性(P均>0.05)。6. Th17/Treg与骨破坏:RA严重骨破坏组(双手X线平片分期Ⅲ期或Ⅳ期,n=23)与非严重骨破坏组(双手X线平片分期Ⅰ期或Ⅱ期,n=34)比较,Th17细胞表达率及Th17/Treg比值升高(P均<0.05),Treg无明显变化(P>0.05);血清IL-23水平较RA非严重骨破坏组升高(P<0.05),而IL-17、IL-6、TGF-β水平无明显变化(P均>0.05);多因素回归分析显示血清IL-23水平及病程对RA患者骨破坏有显著影响(P均<0.05)。7.药物治疗对Th17/Treg的影响:方差分析显示,未治疗组(初发患者和停用激素和NSAIDs≥1月及停用DMARDs≥6月,n=33)与NC组(n=32)比较,Th17细胞表达率及Th17/Treg比值明显升高,Treg细胞表达率明显降低,血清IL-17、IL-6、IL-23水平明显升高,TGF-β水平明显降低(P均<0.05);RA非正规治疗组(使用激素或/和NSAIDs≥1月,未使用或使用DMARDs<6月,n=13)及正规治疗组(使用DMARDs≥6月,n=11)与未治疗组比较,Th17细胞表达率及Th17/Treg比值降低(P均<0.05),Treg细胞表达率无明显变化(P>0.05);RA正规治疗组与非正规治疗组比较,Th17/Treg比值降低(p<0.05),Treg及Th17细胞表达率无明显变化(P均>0.05);RA未治疗组、非正规治疗组与正规治疗组间比较,血清IL-17、IL-6、IL-23、TGF-β水平无明显变化(P均>0.05)。结论1. RA患者Th17细胞明显增多,Treg细胞减少,Th17/Treg比例明显增高;RA早期与非早期组,Th17/Treg无明显变化;T细胞亚群Th17/Treg失衡可能是RA发病的重要原因,贯穿疾病始终,且以Th17占优势。2. Th17相关细胞因子IL-17、IL-6、IL-23水平亦明显升高,细胞因子间互为强正相关关系;而Treg细胞相关细胞因子TGF-β水平无明显变化;RA非早期较早期组,IL-6及IL-23水平升高明显;关节液中IL-17水平较血清中明显升高;IL-6及IL-23推动病情进展,IL-17向关节腔内聚集,参与RA病理过程。3. RA病情活动明显者Th17细胞水平及Th17/Treg比值升高明显,并与TJC、患者疼痛VAS、DAS28等病情活动指标正相关,IL-6水平与患者疼痛VAS正相关,TGF-β与ESR负相关;RA骨破坏严重者Th17细胞水平及Th17/Treg升高明显,IL-23水平升高,IL-23及病程是RA患者骨破坏危险因素;RA患者Th17/Treg失衡及相关细胞因子变化与病情活动及骨破坏有关。4.通过抗风湿药物治疗可降低Th17细胞水平及Th17/Treg比值,调节Th17/Treg细胞亚群平衡。