布氏杆菌病是一种在世界范围内广泛流行并造成严重危害的人畜共患病,布氏杆菌是布氏杆菌病的病原体,它是一种胞内寄生的革兰氏阴性球杆菌,无芽抱,有荚膜,无鞭毛不能运动,不呈两极染色。布氏杆菌病的特点是,一旦发病并转入慢性就无法根治,因此,布氏杆菌病的预防对于控制布氏杆菌病是非常重要的,预防主要通过接种疫苗实现的。我国目前使用比较广泛的减毒活疫苗株有牛流产布氏杆菌S19弱毒疫苗,马耳他布氏杆菌M5弱毒疫苗,以及猪布鲁氏菌S2弱毒疫苗等。在这些疫苗株的使用中还发现,它们具有交叉免疫保护效果,但是,也发现了一个比较严重的缺点,即减毒活疫苗在抗原上与强毒菌株没有大的区别,而布氏杆菌病监测和检疫中主要采取基于S-LPS抗原“O”链特异性抗体而建立的免疫学方法,因此,无法区分是自然感染还是人工免疫,这就很难得出正确的监测和检疫的结果,给检测和检疫带来很大的困难。如何解决现有疫苗的这以主要问题,对于布氏杆菌病的防控具有重要的意义。BP26蛋白是布氏杆菌的一个非常重要的诊断抗原,已有很多用此抗原来进行布氏杆菌诊断的报道。BP26蛋白作为布氏杆菌的一个周质蛋白,对布氏杆菌的毒力不起决定性的作用,但确是布氏杆菌的一个优势抗原,能够诱导高滴度的抗体。BP26蛋白的这些特性,为我们进行研究基因标记疫苗研究提供了很好的靶标。如果对该抗原进行缺失标记,将为鉴别诊断方法的建立提供标识序列。因此,本项目拟利用同源重组的方法,对牛流产布氏杆菌S19弱毒疫苗进行改造,构建成bp26基因缺失的标记疫苗株,命名为S19-△26。小鼠感染模型表明,标记疫苗株S19-△26与亲本株S19具有同样的安全性,残留毒力没有因BP26蛋白的缺失而发生改变,同时S19-△26免疫的小鼠一直没有出现BP26特异性抗体,为鉴别诊断提供可行性。在小鼠免疫保护试验中,S19-△26和S19接种的小鼠具有同样抵抗S544强毒菌株攻击的能力。S19-△26具备从血清学角度区分S19-△26免疫与野生型布氏杆菌感染,对布氏杆菌病防制、监测及净化具有重要的意义。