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目的：从建立表皮干细胞(epidermal stem cells，ESCs)及去分化细胞的模型人手，比较去分化细胞和表皮干细胞功能和生物学特性，为去分化细胞应用于皮肤组织创伤修复的研究奠定基础。
方法：
1.ESCs的体外分离、培养和鉴定人包皮皮片去除皮下脂肪组织，中性蛋白水解酶消化分离表皮和真皮。得到的表皮片剪碎经胰蛋白酶消化，200目筛网研磨滤过。离心收集细胞，接种于铺有Ⅳ型胶原的培养瓶内37℃孵育20min。换液去除悬浮的细胞和杂质，黏附在Ⅳ型胶原被膜上的细胞则为表皮基底层干细胞，胰酶消化传代。镜下观察细胞集落生长情况，用免疫细胞化学染色法、流式细胞术对细胞进行鉴定。
2.人表皮去分化细胞的诱导、扩增及鉴定(1)表皮去分化细胞在体环境制备及鉴定人包皮的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘连、冲洗去除表皮干细胞，处理后的表皮片移植到全层皮肤切割伤BALB/c裸鼠，7d后用免疫组织化学法检测移植的存活皮片的表型改变。(2)表皮去分化细胞离体条件下的诱导、培养及鉴定体外培养表皮角质细胞(human epidermal keratinocytes，HEKs)，待细胞生长稳定后，加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)诱导培养，用免疫细胞化学染色法、流式细胞术对诱导后细胞进行鉴定。
3.利用TRAP、激光共聚焦技术检测ESCs和去分化细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)定位表达，同时对细胞周期及染色体核型进行分析。
结果：
1.ESCs呈集落性生长，阳性表达β1整合素、CK19和CK14，而CK10阴性表达。
2.用Ⅳ型胶原粘连后的包皮皮片CK19和β1整合素染色阴性；移植7d后存活皮片CK19和β1整合素阳性染色呈多层分布，而不是正常表皮中的单层分布。体外培养HEKs加入100ng/ml bFGF组，2w后可见细胞呈克隆样生长，生长状态良好，CK19和CK14呈阳性表达。
3.ESCs和去分化细胞都具有端粒酶活性，并与细胞周期密切相关；两者hTERT核仁定位与肿瘤细胞存在差异；ESCs和去分化细胞均为正常核型。
结论：
1.本实验的分离培养体系能够成功的获得保持未分化状态的ESCs。
2.进一步确证去分化这一生物学现象存在的可靠性；表皮细胞的去分化与bFGF的诱导作用有关。
3.ESCs、表皮去分化细胞hTERT核定位与肿瘤细胞存在一定的差异性。