一,云南省德宏州HIV单阳夫妻HSV-2新发感染率及其影响因素研究研究目的：了解云南省德宏州HIV感染状况不一致夫妻(简称"HIV单阳夫妻”)中单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的新发感染率及其影响因素,为预防控制HSV-2传播和流行提供依据。研究方法：云南省德宏州所辖5个县市中2009年6月启动调查时随访的存活HIV感染者人数在20及以上的全部34个乡镇全部纳入研究,在这些乡镇内招募一方感染HIV、另一方未感染HIV的夫妻(简称"HIV单阳夫妻”)参加调查,采集血样检测HSV-2抗体,获得基线HSV-2感染率。一年后对基线调查HSV-2 IgG抗体阴性的对象进行随访调查并再次抽取血样进行HSV-2 IgG抗体检测,获得HSV-2新发感染率,结合HIV单阳夫妻人口学、行为学及感染特征,采用Cox比例风险模型分析终期HSV-2新发感染的危险因素。研究结果：(1)基线招募HIV感染者1048人、HIV阴性配偶1022人；基线HIV感染者HSV-2感染率为36.4%,其中男性感染率为29.4%,女性感染率为61.1%；阴性配偶基线HSV-2感染率为28.9%,其中男性感染率为25.7%,女性感染率为29.7%。(2)至2010年6月底,共进入队列研究HSV-2阴性的HIV感染者有667人,阴性配偶有727人,终末调查时HIV感染者中失访248人,随访者和失访者在性别、年龄、文化程度、职业分布上的差异无统计学意义,失访者中傣族及来自于盈江县者所占的比例均显著高于随访者。终末调查阴性配偶中失访194人,随访者和失访者在性别、年龄、文化程度、职业分布上的差异无统计学意义,失访者中汉族及来自于盈江县者所占的比例均显著高于随访者。(3)终末调查时HIV感染者HSV-2发病密度为2.98/100人年；其中男、女性发病密度分别为2.83/100人年和3.96/100人年；阴性配偶HSV-2发病密度为4.17/100人年；其中男性为8.22/100人年,女性为3.18/100人年。多因素分析显示,配偶中汉族HSV-2发病风险高于傣族等其他民族,差异有统计学意义(HR=3.13,95%CI：1.15-8.54)；HIV单阳夫妻各自HSV-2新发感染情况均与对方基线HSV-2感染相关,基线阴配HSV-2阳性者其阳性配偶HSV-2新发感染风险高于基线阴偶HSV-2阴性者的HIV阳性配偶(HR=13.15,95%CI：3.11-55.52),基线合并感染HSV-2的HIV感染者其配偶终期HSV-2新发感染风险为基线未合并感染HSV-2的HIV感染者的配偶的5.87倍(HR=5.87,95%CI：2.07-16.66)。研究结论：HIV单阳夫妻的基线HSV-2感染率及终期HSV-2新发感染率均较高；基线时HIV感染者中女性HSV-2感染率高于男性,而终末调查时配偶中男性HSV-2新发感染率高于女性,HIV单阳夫妻各自HSV-2新发感染情况与对方基线HSV-2感染相关,存在HSV-2在夫妻间相互传播的现象,特别是HIV感染者本身HSV-2感染率较高,推测传播途径多为从HIV感染者到配偶,使配偶处于HIV及HSV-2感染的双重风险中。提示尽早、尽快在HSV-2单阳夫妻中开展相关干预及治疗措施势在必行,同时此举对控制HIV从高危人群向一般人群传播也具有深远的意义。二,上海及浙江台州地区HSV-2基因亚型研究研究目的：探讨HSV-2分子分型方法,了解我国HSV-2基因亚型分布情况,为进一步相关分子流行病学研究奠定基础。研究方法：以上海和浙江台州性病门诊作为标本采集地,从临床确诊生殖器疱疹病人水疱部位采集疱疹液标本,分离病毒并在Vero细胞中培养,待80%细胞出现细胞病变即收获细胞,取上清液提取病毒DNA作进一步实验。根据GenBank中HSV-2国际标准株HG52全基因序列以及以往文献设计引物扩增HSV-2 US4和US6全基因片段,将PCR鉴定正确的扩增产物送测序公司回收和测序。测定的序列采用ClustalX2.0软件进行多重比对,SplitsTree4.0软件绘制重组网络,Simplot3.5.1软件中的"Bootscan方法”验证重组事件。剔除具有重组信号的病毒分离株后,与GenBank中下载的48株HSV-2病毒US4基因序列和6株病毒US6基因序列一起进行比对分析,采用最大似然法绘制分子进化树鉴定HSV-2的分子分型情况,100次循环bootstrap检验估算进化树的可靠性。研究结果：(1)Vero细胞产生明显的细胞病变效应,病毒成功地在Vero细胞中扩增。30份采集自上海的疱疹液标本有20份出现CPE,病毒分离率为66.7%；13份采自浙江台州的疱疹液样本中有12份出现CPE,病毒分离率为92.3%。(2)提取病毒DNA,扩增US4和US6全基因片段,经电泳鉴定在2180bp及1200bp左右有扩增带,大小与目标片段相符,32份CPE阳性标本均成功扩增。(3)所测得的序列经多重比对后显示,US4基因间及US6基因间同源性都较高,其中US4基因比对序列上探测到34个突变位点,其中15个(45.7%)为同义突变,19个(54.3%)为非同义突变；US6基因比对序列发现有10个突变位点,其中6个(60%)为同义突变,4个(40%)为非同义突变。(4)以HSV-2国际标准株HG52的对应序列作为外部参照,对US4基因和US6基因各自构建重组网络,US6基因网络图基本为树枝状分叉,而US4基因呈现复杂且相互交织的网络拓扑结构,采用Bootscan方法验证为重组信号。将具有重组信号的的样本去除后再次构建重组网络,US4基因的网络图呈现树枝状分叉。去除US4及US6基因的重组网络图均显示HSV-2的序列可分为两大主要分支。(5)将以往研究报道的48株HSV-2病毒分离株US4基因序列以及GenBank下载的另外6株病毒US6基因序列加入本研究进行序列比对.,去除具有重组信号的样本后采用PhyML软件对比对好的序列绘制系统进化树,US4基因的分子进化结果显示,8株坦桑尼亚的病毒序列聚集于一簇,为A亚型；8株坦桑尼亚、挪威和瑞典的病毒序列,10株本研究采集的病毒序列以及HSV-2国际标准株HG52为B亚型；而另外12株本研究采集的病毒分离株US4基因序列从A亚型及B亚型中分化出来,聚集于一簇,本研究暂定为B’亚型。US6基因分子进化结果显示,16株上海的病毒分离株基因序列、7株浙江的病毒分离株基因序列、2株瑞典的病毒序列、3株美国的病毒序列以及HSV-2国际标准株HG52在分子进化树上处于一簇,为B亚型；而其他8株本研究的病毒序列(4株上海,4株台州)以及1株伊朗的病毒序列处于同一分支,为B’亚型。Bootstrap检验各主要分支统计值达75以上,证实进化树的可靠性。研究结论：本研究首次提出存在HSV-2的B’亚型,可能是A、B亚型之间进化的过渡型别。目前我国的流行株主要为HSV-2的B亚型及B’亚型。结合以往研究,A亚型主要分布于非洲及部分欧洲地区,B亚型广泛分布于非洲、欧洲、美国以及中国,而B’亚型可能主要存在于亚洲地区(中国及伊朗)的病毒分离株中。病毒基因亚型的分布可能与古代人类的迁徙有关,同时疱疹病毒的基因内及基因间重组也对HSV-2的进化起着重要的推动作用。