四种中药多糖免疫增强作用的研究

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在动物生产中,通过应用免疫增强剂提高免疫功能,从而增强对病毒性传染病的抵抗力具有重要意义。然而目前常用的免疫增强剂大多是化学合成类,存在药物残留隐患。随着人们对食品安全的关注,天然药物显示出一定优势。研究表明,许多中药成分有免疫增强作用。多糖为一类重要的中药成分,不仅有抗病毒的作用,而且能增加机体的免疫能力,作为免疫增强剂具有安全低毒、不易在畜产品中产生有害残留等优点。本研究选择4种中药多糖为研究对象,主要从体内、体外两个方面研究了它们增强免疫的作用和机理,旨在为开发多糖类免疫增强剂提供理论依据。研究分为以下5个部分:为了给整个研究准备材料,选择文献报道具有较好免疫增强作用的黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、山药多糖(CYPS)、牛膝多糖(ARPS)4种中药多糖作为研究对象。采用水煎醇沉法提取,用硫酸葸酮法测定多糖的含量。结果,APS、IRPS、CYPS、ARPS的提取率(g·Kg-1)分别为37.4、59.1、53.6、48.9,糖含量(%)分别为65.8、56.7、73.5、54.9。为了研究4种中药多糖增强细胞免疫的作用和机理,将5种浓度的黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、牛膝多糖(ARPS)和山药多糖(CYPS)分别加入到培养的鸡脾脏淋巴细胞中,培养24 h时收集细胞培养上清液,测定一氧化氮含量和一氧化氮合酶的活力;培养48 h时后用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。结果表明,适宜浓度的4种多糖均能提高细胞培养液中一氧化氮的含量、一氧化氮合酶的活力和促进淋巴细胞增殖,且效果相当。这可能是多糖提高细胞免疫功能的机理之一。为了观察4种多糖对非特异性免疫功能的影响并筛选出合适的剂量,选取102只小鼠随机分为17组,16个试验组的小鼠分别腹腔注射4种浓度的黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、牛膝多糖(ARIAS)和山药多糖(CYPS)溶液,对照组注射生理盐水,每天1次,连续3天。第8天分别测定腹腔巨噬细胞吞噬功能、溶血素及溶血空斑的变化。结果显示,4种多糖均能增强巨噬细胞的吞噬功能,提高溶血空斑及溶血素水平;APS在30mg·kg-1、IRPS在20 mg·kg-1、ARPS和CYPS在50 mg·kg-1时的效果较好。为了研究4种多糖增强特异性免疫和非特异性免疫的作用和机理,选取450羽罗曼公鸡随机均分成9组,14日龄用新支二联弱毒苗点眼滴鼻首免、28日龄肌肉注射二免,在首次免疫的同时,8个试验组分别肌肉注射高、低剂量的黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、牛膝多糖(ARPS)和山药多糖(CYPS)溶液,对照组注射生理盐水,每天1次,连续注射3次。分别于首次免疫后第7、14、21、28、35、42、49和56天,用微量法测定新城疫HI抗体效价:于首次免疫后第10、20、30、40、50和60天,称取体重、脾脏、胸腺和法氏囊的重量,计算免疫器官指数。结果,低剂量的APS、IRPS和高剂量的ARPS、CYPS均能显著提高ND HI抗体效价和免疫器官指数,且低剂量的APS、IRPS效果较好。表明4种多糖既可以协同疫苗增强特异性免疫,也能促进免疫器官的发育以提高非特异性免疫。为了研究4种多糖体内增强细胞免疫的作用和机理,选取450羽罗曼公鸡随机均分成9组,14日龄用新支二联弱毒苗点眼滴鼻首免、28日龄肌肉注射二免,在首次免疫的同时,8个试验组分别肌肉注射高、低剂量的黄芪多糖、板蓝根多糖、牛膝多糖和山药多糖溶液,对照组注射生理盐水,每天1次,连续注射3次。于首次免疫后第lO、20、30、40、50和60天,用MTT法测定外周血T淋巴细胞增殖的动态变化。结果表明,4种多糖均能显著促进外周血中T淋巴细胞增殖,低剂量的APS和IRPS的效果最好。这可能是4种多糖增强细胞免疫的机理之一。试验结果表明,低剂量的APS、IRPS和高剂量的ARPS、CYPS效果较好,其中以低剂量的APS、IRPS为最好。这也就为把这几种多糖开发为免疫增强剂提供了比较可靠的理论和现实依据。
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