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背景：原发性肝癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,根据流行病学调查,肝癌在世界恶性肿瘤发病率排行中居第五位,在癌症致死率排行榜列第三位,居我国城乡恶性肿瘤死亡率第二位,每年有约30万人死于肝癌,并且仍有可能上升,肝癌具有“最难发现、最难诊断、最难治疗、发展最快、预后最差”的特点,；而且即使根治性切除,5年复发率仍高达70%左右,我国因肝癌死亡的人数占世界肝癌死亡人数的45%。目前肝细胞癌的治疗效果远未尽人意,而且研究显示：传统的肿瘤治疗方法虽然对某些特殊类型的肿瘤及一些类型恶性肿瘤有较好的效果,但低氧条件下化疗的细胞毒作用,手术操作的过程都有可能选择出恶性程度更高、更容易转移的癌细胞,以及对放化疗抵抗力更强的癌细胞,这些治疗措施甚至会促使癌细胞扩散转移。因此发展新的抗癌治疗措施势在必行。绿脓杆菌制剂(PA-MSHA)是以普通绿脓杆菌为载体表达甘露糖敏感性菌毛的细菌灭活制剂,除了能作为大分子抗原刺激机体,全面提高和调节人体的体液免疫和细胞免疫功能外,其菌毛还能特异性的与高甘露糖表达型的肿瘤细胞结合,改变肿瘤细胞膜的结构和功能,使癌细胞生物学行为改变,是目前细菌抗肿瘤的研究热点之一。人们往往对癌症转移束手无策,药物治疗效果欠佳,手术无法切除,但是研究显示：细菌对转移癌有治疗作用。细菌疗法抗肿瘤的效果在不同的模型相差较大,具体机制还不是很明确。VX2肿瘤是兔乳头瘤恶变而成的上皮来源的恶性肿瘤,可在大型动物体内生长,其生长侵袭方式与淋巴结转移、血液转移与头颈部鳞癌、肝癌极为相似,具有小型实验动物肿瘤模型所无法比拟的优越性。常用于恶性肿瘤介入和射频治疗的研究及影像学和动物模型的建立研究。经皮肝穿刺治疗肿瘤(Percutaneous intratumor treatment, PIT)是目前治疗肝癌的主要手段之一,具有创伤小,痛苦少,疗效肯定的优势,目前可以注射无水酒精、乙酸,或进行射频消融,其中射频消融治疗小肝癌的效果可与手术相媲美。研究表明,绿脓杆菌制剂有明显的抑制肿瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡的作用,并且已经证实是安全的,利用绿脓杆菌制剂在兔VX2肿瘤模型上进行经皮肝穿刺治疗,观察绿脓杆菌对肿瘤的作用,国内外还没有相关报道。目的：1.建立兔VX2肝癌的模型；2.经皮肝穿刺瘤内注射绿脓脓杆菌制剂作用于肝癌组织细胞,并观察肿瘤生长情况3.HE染色剂Tunel染色观察肿瘤组织细胞坏死凋亡的情况,检测该药品对肝癌组织细胞的影响。方法：1.制备兔VX2肝癌肿瘤模型,取瘤兔腿部肿瘤,剪碎成大小约1mm3大小组织块,手术接种于新西兰兔左叶肝脏。2.兔VX2肝癌超声影像学检查将种植VX2肿瘤组织块的动物于术后2周行超声检查观察肿瘤生长情况,测定肿瘤体积,标定肿瘤最佳穿刺位置,测定体积后当天及以后每隔1天原位注射一次,每隔8天超声声测量肿瘤体积,共24天测量四次3.实验分组及给药方法：将成功接种VX2肝癌2周后的40只新西兰白兔随机分为A、B、C、D组,每只10只。A组：生理盐水对照组,B组：小剂量绿脓杆菌制剂组,C组：中剂量绿脓杆菌制剂,D组：大剂量绿脓杆菌制剂。4.HE染色观察及细胞凋亡采用DNA缺口末端标记(TUNEL)法检测肿瘤组织中凋亡细胞。5.观察指标及方法：(1)各组实验模型动物于治疗前,治疗后8d、16d、24d行超声扫描,测量肿瘤的长、短径,肿瘤的体积(V)按公式：V=1/2ab2计算(其中a为最大径,b为最小径),并计算肿瘤生长率(治疗后肿瘤体积/治疗前肿瘤体积×100%)。(2)治疗后24天行超声查完毕,4组实验兔各处死4只,留取肿瘤组织标本,10%的福尔马林固定,石蜡包埋切片,切片厚度4u m,行免疫组化染色及测定肿瘤坏死率,肿瘤坏死率=肿瘤坏死区面积(cm2)/肿瘤面积(cm2)×100%。(3)显微镜下观察步骤(2)各组4只兔肿瘤组织切片中范围内凋亡细胞数,计算凋亡指数：细胞凋亡指数=凋亡细胞数/总细胞数×100%结果：1.本研究采用肿瘤组织块直接肝内种植法制作兔肝VX2肿瘤模型,接种成功率达100%。种植后2周,超声下兔VX2肝肿瘤均表现为类圆形等回声灶,亦有少数表现为低回声灶,周围可见声晕(彩色多普勒和能量多普勒均可检出血流信号),当肿瘤内部出现坏死时,根据坏死成分的不同,可出现低回声的液化坏死区及较高回声的干酪样坏死区,二维超声检出的肝内肿瘤,彩色多普勒和能量多普勒均可检出血流信号,表现为瘤体内星点状、短条状或多条血管分支,肿瘤周围有粗大的血管呈弧形包绕,部分可见血管分支进入瘤内,频谱多普勒显示瘤周的血供主要为高速低阻的动脉流速曲线,少数可见低速随呼吸周期性变化的静脉流速曲线,离皮肤表面距离约0.7cm可穿刺注射。预实验处死动物后检查可见在肝实质内肿块呈圆形或近似圆形实体瘤,无包膜,外观为白色,隆起于正常肝脏表面。肿瘤切面呈灰白色、鱼肉样、质硬,其中心可见缺血坏死灶：2.(1)治疗后8d,16d,24d实验组肿瘤体积都明显小于生理盐水对照组,差异有统计学意义(P<0.05),小剂量和中等剂量相比无统计学差异(P>0.05)。小剂量组与大剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)、凋亡指数各实验组均高于生理盐水对照组,差异有统计学意义(P<0.05),小剂量和中等剂量相比无统计学差异(P>0.05)。小剂量组与大剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)实验组肿瘤组织切片和生理盐水对照组相比坏死面积明显扩大,差异有统计学意义(P<0.05)小剂量和中等剂量相比无统计学差异(P>0.05)。小剂量组与大剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：(1).肿瘤组织块种植法建立兔VX2肝癌模型成功率高,周期短,超声可有效监测肿瘤生长情况。(2).经皮肝穿刺瘤内注射PA-MSHA可以显著抑制兔VX2肝癌的生长,并随PA-MSHA注射剂量的增大,对兔VX2肝癌的抑制作用越显著。(3).经皮肝穿刺瘤内注射PA-MSHA随剂量增加,促进兔肝VX2肿瘤细胞的凋亡也越明显,同时可以导致肿瘤组织坏死。