枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)可以产生很多种抑菌物质,在医药、饲料添加、食品添加、洗涤剂、开采石油、环境保护等各个方面都有极大的应用前景。实验室前期得到一株组氨酸缺陷型突变株B.subtilis D14-24R(his~-)。测定其遗传标记,在缺乏组氨酸的条件下不生长,低浓度组氨酸时可以生长,但是在高浓度组氨酸存在时生长被抑制。本研究以B.subtilis D14-24R材料,探索产生抑制作用的原因、组氨酸与生长及抑制作用的关系,抑菌物质(AT)积累的培养条件,并在此基础进行AT的分离纯化及性质研究。主要结果如下:(1)B.subtilis D14-24R既是组氨酸营养缺陷型,也是组氨酸利用缺陷型(渗漏缺陷型),其在缺乏组氨酸的基本培养基上不生长,在补充适宜浓度组氨酸的时候可以生长。高浓度的组氨酸(>2 g/L)存在时,则积累AT,菌体生长受到抑制。(2)建立了二步培养法制备AT:在LB培养基上增菌,收集菌体转入补充有组氨酸的培养基,培养36 h可积累AT达400 u/mL。(3)建立了一步培养法制备AT,通过条件优化,较合适的培养基配方:葡萄糖15g/L、胰蛋白胨20 g/L、组氨酸2 g/L、酵母提取物5 g/L、NaCl 10 g/L,装液量为90 mL/500mL,37℃培养18-24 h可积累AT达1600 u/mL。一步培养法产AT量比二步培养法提高了4倍,且方法简化,易于分离提取。(4)测试了活性炭材料对AT的吸附能力,其中粉末活性炭可以很彻底地将AT从培养液中提取出来,但脱吸附困难,目前尚未找到合适的有机洗脱剂。进行了7种有机溶剂对AT的萃取试验,结果表明三氯甲烷萃取效果较好。经三氯甲烷萃取、旋蒸制备得到AT粗品。(5)利用制备的AT粗品对33株微生物进行了抑菌试验,AT对供试的24株G~+细菌中10株有抑制作用;对供试的G~—菌、酵母菌和霉菌没有抑制作用。AT在pH 6-12稳定,在pH<4不稳定;在60℃以下稳定,高于60℃不稳定;蛋白酶处理不影响其抑菌活性。