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近年来,随着规模化和集约化养殖模式的不断发展,我国水产养殖业取得了长足进步和迅猛的发展。但是,鱼体脂过度沉积导致的一系列疾病问题也随之而来,严重时会降低其免疫力,导致大量的死亡,成为当前养殖业面临的普遍难题。肠道微生物及其编码的元件在动物营养代谢、抵御感染和免疫应答等过程均起到很重要的作用,为了有效地缓解鱼类脂肪肝这一难题,本研究论文拟通过细菌Akkermansia muciniphila膜蛋白-Amuc1100(之后简称为AM)来实施鱼类脂代谢调控,达到减少肝脏脂肪过度积累的目的。本实验首先构建AM的大肠杆菌原核表达体系,通过蛋白表达和纯化过程获得靶蛋白,然后以斑马鱼为模型设置以高脂饲料为对照的6个处理组,分别为LFD(low-fat diet,低脂饲料)、HFD(high-fat diet,高脂饲料)、HFD+25μg/g、HFD+50μg/g,HFD+100μg/g和HFD+200μg/g,以确定最适添加量,每个处理组4个平行,每个平行18尾鱼,每天9:00和16:00各进行一次定量(每顿为体重的3%,初始投喂为每顿20mg)投喂,养殖周期为14天,期间维持水温28℃±3℃。在养殖期间,观察有无死亡。养殖结束后,分别对每缸鱼进行单尾称重。生长结果表明,每个处理组的鱼存活率为100%,HFD末重及增重率最高,显著高于LFD(P<0.05),同时随着AM蛋白添加水平的提升其降低鱼体增重的能力增强,当添加量为100μg/g AM蛋白时的增重率是最低(P<0.01),之后在200μg/g添加组的末重及增重率略有上升;而饲料转化率在100μg/g AM蛋白添加组效果最明显,值为1.60,极显著高于HFD(P<0.01);进一步肝组织的TAG(triacylglycerol,三酰甘油)含量检测结果为HFD处理组的含量最高,显著高于LFD(P<0.05),AM蛋白处理组随着添加量水平也是呈现先降低后升高趋势,AM添加量为100μg/g组的TAG含量最低,为17.91μg/mg,P<0.01;全鱼HE切片结果更进一步证实100μg/g AM处理组相对HFD而言,表现出明显的脂滴减少,这些结果均证实了AM蛋白的减脂功效,最适添加水平为100μg/g。为了进一步解析AM蛋白的降脂功效,我们选择100μg/g添加水平进行作用机制研究。首先对斑马鱼肝脏和肠道进行了TNF-α和TGF-β的炎症因子的荧光定量PCR,结果显示相比于HFD,AM蛋白组与HFD组表现出一致的表达水平,并没有显著上调和下调,表明AM蛋白的降低体重作用不是由炎症介导的;对Toll样受体(TLR)家族进行了筛选,发现在肠道中,相对于HFD,AM蛋白组的TLR1和TLR4ba基因mRNA的表达量分别上调了1.72倍(P<0.01)和1.54倍(P<0.05);推测TLR1和TLR4ba为AM蛋白的作用通路;最后还进行了脂代谢相关基因的检测,结果表明,AM蛋白主要是通过上调肝脏β-氧化相关基因PPARα、ACOX3和CPT1来减少肝脏中甘油三酯的含量的。通过此次研究,结果表明AM蛋白具有缓解鱼类脂肪肝作用,通过受体TLR1或TLR4ba通路介导,进一步调控肝脏中脂代谢通路,如上调脂代谢β-氧化作用,以达到高脂诱导条件下的减少脂肪蓄积目的。