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目的通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因,构建pSilencer4.1-shRNA-Shp2重组质粒,转染慢性髓系白血病K562细胞株,探索该基因的沉默表达对K562细胞的抑制效应,为后续研究其作用机制及体内抗白血病效应检测奠定基础。方法1、设计3对特异性针对Shp2基因的寡核苷酸序列,退火形成shRNA,插入pSilencer4.1-CMV neo载体并转染K562细胞,经real-timePCR和Western blot检测Shp2基因及其蛋白的表达率,筛选出最佳干扰转染组。2、选择干扰效率较高的pSilencer4.1Shp2/560质粒转染K562细胞,采用RT-PCR及real-time PCR、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、BCR/ABL融合蛋白的表达水平、K562细胞生长增殖变化及细胞凋亡率。结果1、酶切及测序证实pSilencer4.1Shp2/560、pSilencer4.1Shp2/1435、pSilencer4.1Shp2/1783重组质粒构建成功。2、重组质粒转染K562细胞后,与阴性对照组及空白K562细胞对照组比较,能明显下调细胞中Shp2基因及其蛋白的表达水平。3、选取干扰效率较高的pSilencer4.1Shp2/560重组质粒转染K562细胞后,经检测其bcr/abl融合基因及BCR/ABL融合蛋白表达水平均明显下调、K562细胞增殖活力被抑制(P<0.05)、细胞凋亡水平上升(P<0.05)。与对照组相比较,其差异均具有统计学意义。结论pSilencer4.1Shp2/560稳定转染组可显著降低K562细胞中bcr/abl融合基因及其蛋白的表达水平,抑制K562细胞的生物学效应,表明在细胞水平上沉默Shp2基因可成为治疗慢性粒细胞白血病的有效靶点。