NADC30-like PRRSV分离鉴定及反向遗传平台构建

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangjuan860405
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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种急性传染病,能够引起猪繁殖系统及呼吸系统障碍。PRRSV对不同品种、年龄及性别的猪均有较强的感染性,对全球养猪业造成了巨大的影响。2013年,在河南首次报道了NADC30-like PRRSV毒株,近年来这一亚型毒株在我国大面积暴发,并逐渐发展为各地的优势毒株。该亚型毒株具有许多新的特点,其重组变异度高、致病性相对较弱、免疫抑制能力较强,商业化疫苗难以进行有效防控。因此,深入研究NADC30-like PRRSV毒株的特点对于该病的防控十分重要。本研究在对临床病例分析的基础上,对NADC30-like PRRSV毒株的基因组及致病性特点进行了深入研究,同时构建NADC30-like PRRSV反向遗传操作平台。该研究具体内容及结果如下:1.NADC30-like PRRSV毒株的分离及序列分析自送检病料中成功分离一株NADC30-like PRRSV,命名为XM-2020。随后对该毒株全序列进行测定,并利用生物信息学软件对毒株进行基因组特性分析包括系统发育树构建、氨基酸同源性测定及重组事件检测。比对结果表明,XM-2020株Nsp2区域存在131个不连续氨基酸缺失,与NADC30-like PRRSV毒株基因组特征一致。序列非结构蛋白区域存在两个重组断裂点,表明该毒株系NADC30-like PRRSV与HP-RRRSV的重组产物。2.XM-2020株致病性评估与HP-PRRSV毒株的致病性比较试验表明,XM-2020株引起的临床症状更为轻微,如仔猪出现的高热不如高致病毒株明显,同时出现明显的腹泻症状。但仔猪血清抗体水平明显低于高致病毒株组,感染XM-2020病毒血症更为严重,同时肠道及肺脏病毒载量更高。这说明XM-2020毒株致病性低于HP-PRRSV毒株,但感染XM-2020株的仔猪肠道存在明显的病变。3.XM-2020株反向遗传平台建立成功扩增并拼接XM-2020全基因组,构建含毒株全长的感染性克隆。通过转染BHK-21细胞成功拯救r XM-2020毒株及r XM-2020-BFP毒株,经测定,拯救毒株具有与亲本毒株相似的生长曲线。综上,本研究成功分离鉴定一株NADC30-like PRRSV毒株,并对该毒株基因组特征进行比较分析,为确定当地PRRSV流行现状提供了参考数据。该毒株致病性比HPPRRSV低,但能在肠道引起病变,这对于NADC30-like PRRSV亚群的防控具有指导意义。此外,反向遗传平台的成功构建为下一步NADC30-like PRRSV亚群感染各器官能力增强的相关研究提供了技术支持。
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