促红细胞生成素对缺氧气血性脑损伤新生大鼠脑组织Fas/FasL表达的影响

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目的:通过观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后的脑组织病理变化,探讨促红细胞生成素(EPO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的Fas/FasL表达的影响以及促红细胞生成素EPO对缺氧缺血脑损伤保护作用的机制,为促红细胞生成素(EPO)临床治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤提供实验和理论依据。  方法:选取120只健康的新生大鼠,将其随机分为假手术组、缺氧缺血组和缺氧缺血后EPO治疗组。假手术组不进行缺氧处理,HIBD组和EPO治疗组均制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型。之后EPO治疗组按3000U/kg腹腔注射EPO,其余两组分别注射相应的灭菌生理盐水,每组于6h、12h、24h、48h、72h各处死8只,灌注固定后取脑组织常规石蜡包埋、切片,HE染色观察神经细胞形态变化,并使用免疫组织化学染色法检测三组大鼠不同时间点Fas及FasL在大脑皮层的表达。并对其进行图像采集与分析,每张切片随机选取3个高倍视野(×400),根据染色强度测定阳性信号OD。用SPSS17.0统计分析软件进行数据分析,先后采用正态性检验、方差分析、q检验、秩和检验以及Pearson分析等统计学方法,设P<0.05表示差异有统计学意义。  结果:  1、神经功能改变:假手术组无明显神经系统异常改变,HIBD组大鼠的在各个时间点的行为评分与假手术组和EPO治疗组均有明显的差异(P<0.05),且随着时间的延长而逐渐升高,EPO治疗组在1h、2h、4h时与假手术组的行为评分有显著差异(P<0.05),随着时间的延长其行为评分逐渐降低,最后几个时间点则逐渐与假手术组的评分相接近,差异没有统计学意义(P>0.05)。  2、脑组织病理变化观察:假手术组大鼠的脑组织皮质部位的结构以及细胞层次都显示得非常清楚;HIBD组大鼠缺氧缺血6h时,发现神经元细胞出现水肿现象,缺氧缺血12h时,神经元细胞中细胞器的结构均有不同程度的损害,缺氧缺血24h时,脑组织中出现局灶性坏死的现象,缺氧缺血后48h时,脑组织中可以看到大范围的组织坏死,,神经元细胞中的细胞核发生破碎现象,缺氧缺血72h时,脑组织中能够清晰地看到坏死灶的界限,神经细胞接近死亡状态;EPO治疗组大鼠在EPO治疗后6h时,神经元结构相对模糊,EPO治疗12h时,神经元细胞发生轻微的水肿,EPO治疗24h-48h时,神经元细胞中的核膜核仁均清晰可见,核仁偏离中心位置,EPO治疗72h时,神经元细胞结构层次清晰,核仁位于中心位置。  3、各组大鼠脑细胞在不同时间点Fas的表达:假手术组各时间点几乎均无明显Fas表达。HIBD组于缺氧处理后6h开始出现Fas阳性细胞,且Fas的表达随着缺氧时间的延长而增加,在24h时达到Fas表达峰值;HIBD组各时间点Fas的表达与假手术组相比,均有统计学意义(P<0.05)。EPO治疗组在相同时间点Fas表达显著低于缺氧缺血组(P<0.05)。  4、各组脑细胞在不同时间点FasL的表达:各组FasL的表达与Fas十分类似。在假手术组,FasL于各时间点仅有极少量表达。HIBD组的FasL阳性细胞于缺氧处理后6h开始出现,也随着缺氧时间的延长而增加,FasL表达在24h时达到峰值;HIBD组各时间点FasL的表达与假手术组相比,均有显著增加(P<0.05)。EPO治疗组在相同时间点Fas表达明显高于假手术组(P<0.05),但显著低于HIBD组(P<0.05)。  结论:  1、在缺氧缺血后6h,Fas的合成在脑细胞胞浆开始逐渐增多,在24h时达高峰,随着其增多FasL蛋白表达也逐渐增多,于24h达高峰,Fas的蛋白表达先于FasL,且通过直线相关分析两者的表达呈正相关关系,初步推断Fas蛋白的活化可以上调FasL蛋白的表达。  2、Fas/FasL与脑细胞凋亡有直接关系,是缺氧缺血性脑损伤的发病机制之一。  3、EPO可明显减少HIBD新生大鼠脑组织中Fas及FasL的表达,进而抑制脑组织缺氧缺血损伤后的细胞凋亡。
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