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玉米是世界上重要的粮食作物,盐旱等非生物胁迫是限制玉米生产的重要因素,挖掘玉米耐盐旱基因并进行功能研究,不但具有重要的理论意义,而且具有广泛的应用价值,可以为玉米抗逆转基因育种提供潜在的有效候选基因。 植物中液泡膜焦磷酸酶(vacuolar pyrophosphatase,VPP)是结合在植物液泡膜上的一类焦磷酸酶,具有焦磷酸酶活性和质子泵功能。可以将焦磷酸分解,把H+从细胞质泵入到液泡中,建立起跨膜H+梯度,为Na+/H+逆向转运蛋白提供动力。研究发现拟南芥中VPP的过表达可以提高植物的耐盐性与耐旱性。自从1975年首次提取到VPP以来,现已在多种植物中克隆到VPP基因。前人研究主要集中在焦磷酸酶的生理活性的变化和胁迫条件下其他生理指标的变化上,对逆境胁迫下基因表达量的变化和组织特异性表达研究较少,玉米中VPP的耐盐性研究及启动子分析未见报道。植物中的隐花色素(cryptochrome,CRY)是一种蓝光受体,可以调节中胚轴的伸长,提高耐深播能力,有可能提高作物的耐旱性,在玉米中的研究未见报道。 本研究在玉米中克隆到ZmVPP1基因,对其表达特性和功能进行分析。同时对玉米中ZmCRY1基因进行了电子克隆与生物信息学分析。主要结果如下: 1、ZmVPP1基因的克隆与序列分析采用同源克隆的方法,克隆得到ZmVPP1全长cDNA,同时在数据库中得到ZmVPP1的DNA和启动子序列。该基因属于H_PPase superfamily(GenBank登录号为cl11452)。对ZmVPP1启动子进行顺式作用元件分析,发现具有受低温、脱落酸、水杨酸、茉莉酸等诱导的一系列顺式调控元件。 2、ZmVPP1基因在玉米中的表达分析正常生长条件下,ZmVPP1在玉米的成熟叶片中表达量较高,而在生殖器官中表达量较少。ZmVPP1受脱水、PEG、盐、低温等条件的诱导表达,但不受ABA诱导。 3、ZmVPP1基因转化野生型拟南芥已成功的转化到野生型拟南芥,得到15株阳性克隆。筛到T2代。 4、ZmCRY1基因的电子克隆与生物信息学分析利用玉米基因组数据库,电子克隆到玉米ZmCRY1基因的全长cDNA序列。生物信息学分析发现,该基因编码699个氨基酸,属于蓝光受体家族,与其他植物中CRY蛋白具有较高的同源性。