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目的:淋巴结转移（lymph node metastasis,LNM）是胃癌患者发生转移的常见形式,超过50%的胃癌患者在初诊或手术切除时有淋巴结转移,预后较差。越来越多证据表明,外泌体已成为细胞间通讯的主要参与者。肿瘤细胞分泌的外泌体可以通过自分泌、旁分泌和内分泌机制传递信息至受体细胞,从而调节肿瘤发生、淋巴管生成、血管生成等。然而,外泌体是否参与淋巴结转移胃癌与低转移胃癌细胞间的恶性表型传递及其具体分子机制尚不清楚。方法:将淋巴结转移胃癌细胞株HGC-27于BALB/c裸鼠足垫致瘤构建淋巴结转移模型,采用体内连续传代法从淋巴结转移组织分离、建立淋巴结高转移胃癌细胞HGC-27-L。分别采用β氧化速率和CPT1活性检测比较原发灶胃癌细胞AGS、HGC-27和HGC-27-L三者脂肪酸氧化（FAO）能力,将FAO限速酶CPT-1A抑制剂Etomoxir处理转移胃癌细胞,transwell迁移及侵袭试验检测阻断FAO途径对转移胃癌细胞转移能力的影响。超速离心法分别分离低转移AGS、HGC-27和HGC-27-L外泌体并采用电镜、Nano Sight,和Western blotting予以鉴定。将上述分离获得的胃癌细胞外泌体分别与AGS共孵育,采用淋巴道转移模型、transwell迁移和侵袭试验体内外检测比较三种胃癌细胞外泌体对AGS转移能力的影响;β氧化速率和CPT1活性检测分析三种胃癌细胞外泌体对AGS FAO能力的影响。将Etomoxir预处理AGS,检测分析对转移胃癌细胞外泌体增强AGS转移能力影响。采用Label-free定量蛋白组学筛选HGC-27和AGS外泌体间差异蛋白并对其中差异蛋白CD44予以检测验证。设计、合成靶向CD44 si RNAs并分别转染HGC-27和HGC-27-L,敲减转移胃癌细胞外泌体内CD44含量,检测分析CD44敲减对转移胃癌细胞外泌体增强AGS转移能力、FAO能力的影响。Western blotting检测分析胃癌细胞外泌体处理后AGS、敲减CD44转移胃癌细胞及敲减CD44转移胃癌细胞外泌体处理后AGS中CD44、Rho A、p-YAP、YAP、CTGF、CYR61、Prox1和CPT1A蛋白表达变化,分析CD44调控CPT1A的可能的信号通路。采用YAP抑制剂Verteporfin预处理AGS,检测分析YAP信号干预对转移胃癌细胞外泌体调控下游CTGF、CYR61、Prox1和CPT1A蛋白表达、增强AGS转移能力及FAO的影响。采用GEPIA数据库比较胃癌组织与正常组织中的CD44、YAP和CPT1A的表达差异及彼此间表达相关性。采用Kaplan Meier plotter数据库分析三种蛋白与胃癌患者五年生存期相关性。采用ELISA检测比较淋巴结转移胃癌与未转移胃癌患者血清外泌体及不同处理组荷瘤小鼠血清外泌体中CD44的含量差异。结果:HGC-27-L体内淋巴结转移能力和体外迁移、侵袭能力较亲本细胞HGC-27和原发灶胃癌细胞AGS显著增强,说明成功构建淋巴结高转移胃癌细胞HGC-27-L。AGS、HGC-27和HGC-27-L三者FAO能力依次增强,Etomoxir处理显著抑制转移胃癌细胞HGC-27和HCG-27-L的迁移和侵袭能力;成功分离制备AGS、HGC-27和HGC-27-L细胞来源外泌体,三种胃癌细胞外泌体依处理依次增强AGS体外迁移、侵袭和FAO代谢能力及体内淋巴结转移能力。Etomoxir预处理显著阻断转移胃癌细胞外泌体对AGS的作用;蛋白组学筛选显示发现CD44仅在HGC-27外泌体检测到,western blotting检测验证显示CD44蛋白含量在AGS、HGC-27和HGC-27-L细胞及其外泌体中依次增加。敲减CD44可显著抑制转移胃癌细胞迁移、侵袭和FAO能力。外泌体内CD44敲减可明显削弱转移胃癌细胞外泌体增强AGS转移和FAO能力;Rho A、YAP、Prox1、CPT1A蛋白表达在AGS、HGC-27和HGC-27-L细胞及其外泌体处理后AGS中依次增加,p-YAP呈现相反趋势。CD44敲减抑制胃癌细胞中Rho A、YAP、Prox1、CPT1A蛋白表达,促进YAP磷酸化。Verteporfin处理抑制YAP信号明显降低Prox1和CPT1A蛋白表达;数据库分析显示CD44、YAP和CPT1A m RNA在胃癌组织中表达显著上调且彼此间表达成正相关,高表达CD44、YAP和CPT1A m RNA的胃癌患者5年总生存期（OS）,首次进展生存期（FP）和进展后生存期（PPS）较低表达组显著缩短。淋巴结转移胃癌患者血清外泌体CD44含量明显高于未转移组,动物模型血清外泌体CD44浓度与淋巴结转移状态高度相关。结论:FAO对于淋巴结转移胃癌细胞维持其淋巴结转移能力不可或缺。淋巴转移胃癌细胞外泌体传递淋巴结转移恶性表型至原发灶胃癌细胞依赖于FAO代谢重编程。CD44是介导恶性表型传递至关重要的exosomes携载货运蛋白,其可能通过调节Rho A/YAP/Prox1/CPT1A信号轴促进FAO代谢。CD44有望成为淋巴结转移胃癌患者治疗潜在靶点和非创伤性检测生物标志物。