论文部分内容阅读
目前体外受精一胚胎移植(In vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)的胚胎种植率低。胚胎植入是IVF-ET技术临床妊娠的关键,而着床前的胚胎发育一定程度上决定了胚胎的植入潜能。为改善妊娠结局,生殖医学临床在不断改进超促排卵方案以求获得高质量卵子的同时,胚胎实验室也在不断探索胚胎体外发育的合适条件及有利因素。环孢素A(Cyclosporin A, CsA)是一种免疫抑制剂,广泛用于器官移植后免疫排斥反应和免疫性疾病的防治。研究显示,合适剂量的CsA不仅能诱导母胎界面及外周的免疫耐受,还能促进人早孕期绒毛滋养细胞增殖、抑制滋养细胞凋亡,增强其运动、迁移和侵袭能力从而对妊娠起到双重调节作用。绒毛细胞滋养细胞来源于胚胎滋养叶细胞,除滋养细胞外CsA尚对多种细胞的生长具有调节作用,故推测CsA可能在植入前的胚胎发育中发挥作用。目的本研究通过观查不同时期添加CsA和添加不同浓度CsA的培养基中2细胞胚胎体外培养的发育情况,探讨CsA对植入前胚胎发育的影响及起始阶段和有利于早期胚胎发育的最佳剂量。旨在探索体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)中改善胚胎质量,提高胚胎种植潜能的有效途径。方法1.4周龄ICR雌鼠实验前超促排卵,自然交配。实验当天解剖小鼠,收集2细胞胚胎。所获胚胎同等级别均分为几个实验组,卵裂液(cleavage medium, CM)和囊胚液(blastocyst medium, BM)序贯培养,每天观察胚胎发育至囊胚孵出。2.观察从不同时期添加1μmol/LCsA对小鼠胚胎体外发育的影响。胚胎共分三组培养,2细胞期加入CsA组、桑椹胚期加入CsA组和未加CsA组(对照组)。观察各期胚胎发育情况。3.观察不同浓度CsA对小鼠胚胎体外发育的影响。胚胎共分四组培养,培养基分别添加10、1、0.1、0μmol/LCsA。观察各组囊胚形成及孵出情况。4.扩张期囊胚总细胞计数。采用Hoechst 33258荧光染色,荧光显微镜下计数。5.统计方法：采用SPSS13.0统计学软件对实验数据进行统计学分析。定性资料采用卡方检验；定量资料采用方差分析。a=0.05为检验水准,P<0.05为差异有显著性。结果1.从不同时期添加1μmol/L的CsA对早期胚胎发育的影响2细胞期加入CsA,桑葚胚加入CsA和未加入CsA组(对照组),三组胚胎4-8细胞胚胎形成率分别为71.9%、62.5%和63.6%；桑葚胚形成率分别为70.8%、62.5%和62.5%；囊胚形成率分别为62.9%、58%和53.4%；囊胚孵出率分别为37.5%、25.5%和21.3%,差异均无显著性(P>0.05)。2.不同浓度CsA对早期胚胎发育的影响10、1、0.1、0μmol/LCsA组,总囊胚形成率分别为82.1%、73.6%、70.7%和71.3%,差异无统计学意义(P>0.05)；扩张期囊胚形成率分为65.5%、50.6%、47.7%和48.2%,除10μmol/LCsA组与其它三组比较差异有显著性外(P<0.05),其余各组比较均无显著性；囊胚孵出率分别为44.9%、42.2%、34.4%和38.7%,差异无显著性(P>0.05)。囊胚孵出率(Y)和CsA的浓度(X)存在相关性,相关方程Y=0.05251gX+0.405(r=0.9629)。3.不同浓度的CsA对小鼠囊胚总细胞数的影响添加有10、1、0.1、0μmol/LCsA组,扩张囊胚总细胞数(x±s)分别为79±4.5、78+4.2、74.6±4.3和77.2+5.3,除1组和3组比较差异有显著性外(P<0.05),其余各组比较均无显著性(P>0.05)。结论一定剂量的CsA从2细胞期就起到促进胚胎发育的作用,CsA在1-10μmol/L范围内呈剂量依赖性促进小鼠胚胎体外发育的囊胚形成和孵出率。