环介导等温扩增技术在重症社区获得性肺炎病原学诊断中的临床意义研究

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背景:由于缺乏有效的诊断方法,重症社区获得性肺炎(Severe Community-acquired Pneumonia,sCAP)的病原学诊断率低,致患者不能在早期获得针对性治疗。环介导等温扩增(Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP)作为一种新的核酸扩增技术,具有操作简便、对实验条件要求低以及反应时间短等特点,适用于常见病原体的早期检测。目的:验证LAMP检测法诊断sCAP常见病原体的有效性和可行性。方法:研究对象为临床诊断sCAP患者,在入院当天收集痰或肺泡灌洗液检测,采用培养法和LAMP法检测12种常见病原体。以培养法作为标准检测法,研究LAMP法诊断sCAP病原学的灵敏度、特异度和准确度。结果:共纳入79例重症社区获得性肺炎患者中,其中28例(35.4%)经痰培养确定为阳性。以培养法作为标准法,LAMP法检测病原体DNA浓度对数所对应的ROC曲线中,当截断值取2.95时,曲线下面积(Area Under the Curve, AUC)最大为0.871(95%CI0.777-0.936,P<0.05),灵敏度、特异度及其95%CI分别为96.4%(81.7-99.9)和68.6%(54.1-80.9)。LAMP法检测一致性为79.1%,灵敏度为96.4%,特异度为68.6%,阳性预测值为80.0%,阴性预测值为98.0%。28例标准法阳性组中,平均DNA浓度为(lg10 copies/ml)为(4.3±0.9);51例标准法阴性组中,平均DNA浓度(lg10 copies/ml)为(2.5±1.6),两组患者DNA浓度差异有统计学意义(P<0.05)。LAMP法检出率最高的5种病原体依次为铜绿假单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。LAMP法各病原体DNA浓度之和与PCT、白细胞行两两之间的Spearman相关分析,相关系数分别为0.73(95%CI0.60-0.82,P<0.05)、0.42(95%CI0.21-0.59,P<0.05)。结论:1.LAMP法能够作为一项检测sCAP患者常见病原体的手段。2.标准法阳性标本病原体DNA浓度明显高于标准法阴性标本。3.病原体DNA浓度之和与PCT、白细胞存在正相关。
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