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CRISPR/Cas系统作为细菌和古细菌的获得性免疫系统,通过RNA介导,特异性的切割外源遗传物质,用以对抗入侵的病毒和质粒。其中Type Ⅱ CRISPR/Cas系统即CRISPR/Cas9技术已经成功实现包括小鼠在内的许多模式动物的基因组编辑。该技术是利用显微注射法将cas9 mRNA和sgRNA的混合液注射至受精卵实现基因编辑。然而,只有少量国外研究报道了不同显微注射方式对CRISPR/Cas9介导的胚胎的基因敲除效率的影响,国内尚无类似报道。因此,本研究以ICR小鼠作为实验对象,通过显微注射法将cas9 mRNA和sgRNA的混合液分别注射至胞质和原核,探究不同注射方式对CRISPR/Cas9介导的胚胎的早期发育以及基因敲除的影响。在此基础上,研究不同cas9 mRNA和sgRNA浓度对CRISPR/Cas9介导的胚胎的敲除效率的影响。得出以下结论：（一）收集注射hCG后23-24h的小鼠胚胎进行原核注射更有利于胚胎的发育；（二）比较原核注射胚胎和非注射胚胎在各阶段的发育发现,以2-细胞胚胎数量为参数,二者在各阶段的发育率差异不显著。（三）采用胞质注射有利于胚胎的发育,可获得较高的注射成功率和囊胚率；（四）胞质注射和原核注射对于CRISPR/Cas9介导的小鼠胚胎的基因敲除效率差异不显著,但是由于胞质注射更加有利于胚胎的发育,因此,运用CRISPR/Cas9进行小鼠胚胎的基因敲除时,最佳注射方式为胞质注射；（五）利用CRISPR/Cas9进行小鼠胚胎的基因敲除时最佳注射浓度为：20ng/ul Cas9 mRNA+10 ng/ul sgRNA为了建立运用商品化人类精子无卵黄冷冻液SpermCryoTM All-round冷冻保存食蟹猴精子的方法,本研究比较了快速(-435℃/main)、中速(-183℃/n min)和慢速(-69℃/min)的降温速率以及不同冷冻平衡时间(10 和 30min)对食蟹猴精子冷冻保存的效果。本研究建立和优化的SpermCryo无卵黄冷冻液冷冻保存食蟹猴精子的方法可简单快速完成精子的冷冻保存,并获得较好的冷冻复苏存活率。研究结果对深入研究灵长类动物精子冷冻损伤的机制和在辅助生殖中的应用具有重要意义。结果显示：(一)在液氮上方冷冻平衡10min对食蟹猴精子的复苏活力显著高于30min.(二)用快速和中速冷冻速率保存的精子的复苏活力较高,冻存精子的复苏活力明显高于慢速冷冻速率保存的精子。