论文部分内容阅读
目的:通过给SD大鼠灌服α-萘异硫氰酸酯(α-Naphthylisothiocyanat e,ANIT)建立亚急性胆汁淤积症模型,并探讨鼠李糖乳杆菌GG(ATC C 53103)对其肝功能保护胆汁淤积症幼鼠和抗肝纤维化的作用机制。方法:健康清洁级4周龄雄性SD大鼠80只(合格证编号:1907127,1907065),体质量100±20g,在河北医科大学第三医院实验中心动物室饲养笼中常规饲养,饲养环境为屏障环境,置于室温24℃左右,湿度为40%～70%,每12小时交替光照,喂养标准饲料,自由饮水。随机分为5组:对照组(A组)16只、疾病观察组(B1组)16只、熊去氧胆酸干预组(B2组)16只、鼠李糖乳杆菌GG干预组(B3组)16只和联合干预组(B4)16只。模型组大鼠采用ANIT灌胃诱发亚急性肝内胆汁淤积,A组大鼠给予芝麻油灌胃。造模成功后进行不同干预措施:B1组不给予药物干预;B2组给予亚急性胆汁淤积模型鼠UDCA 100mg/kg,1次/日干预;B3组给予亚急性胆汁淤积模型鼠鼠李糖乳杆菌GG(LGG)2.5ml 1次/日干预;B4组给予亚急性胆汁淤积模型鼠UDCA 100mg/kg和鼠李糖乳杆菌GG 2.5ml 1/日联合干预,连续灌服23天。依照各观察时间节点采集大鼠血和肝脏标本,检测相应生化指标如丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、胆汁酸(TBA);肝纤维化指标如透明质酸(HA)、III型前胶原(PCIII)、IV型胶原(c IV)、层粘连蛋白(LN)和肝脏病理观察。采用SPSS23.0软件进行统计学分析。结果:1.SD大鼠灌服α-萘异硫氰酸酯(α-Naphthylisothiocyanate,ANIT)后出现精神倦怠,活动减少,食欲不佳,皮肤暗黄,毛发凌乱失去光泽,尿色深黄。肝脏病理显示,肝组织结构破坏,伴汇管区炎性细胞浸润,存在胆管狭窄,可见淤胆、纤维结缔组织增生,建立了亚急性胆汁淤积大鼠模型。2.亚急性胆汁淤积模型大鼠血生化指标如TBIL、DBIL、TBA、ALP、ALT、AST,以及肝纤维化指标如HA、LN、c IV等均较健康对照大鼠发生显著变化(P<0.05),并且肝脏病理显现出明显胆汁淤积及肝纤维化变化。3.不同干预措施干预后发现,B2、B3、B4组亚急性胆汁淤积模型大鼠的一般状态如精神、食欲及活动均有好转,B3组对上述表现改善更为明显。4.在改善胆红素代谢指标如血清总胆红素、直接胆红素和胆汁酸方面,对于亚急性胆汁淤积模型大鼠实施干预措施后第2天时,B1、B2、B3、B4组大鼠血液中上述指标均高于A组(P<0.05);第9天时,B3组大鼠较B1组下降显著(P<0.05);第16天时,B3、B4组大鼠的上述指标与B1组出现差异(P<0.05);第23天时,B2、B3、B4组均与B1组出现差异,以B4组差异显著(P<0.05)。5.在改善肝功能指标如丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶等方面,亚急性胆汁淤积模型大鼠实施干预措施后第2天时,B1、B2、B3、B4组大鼠血液中上述指标均高于A组(P<0.05);第9天时,B3组大鼠较B1组下降显著(P<0.05);第16天时,B3、B4组大鼠与B1组出现差异(P<0.05);第23天时,B2、B3、B4组均与B1组出现差异,以B4组差异显著(P<0.05);在改善肝纤维化指标如透明质酸、层粘连蛋白和IV型胶原蛋白方面,亚急性胆汁淤积模型大鼠实施干预措施后第2天时,B1、B2、B3、B4组大鼠血液中上述指标均高于A组(P<0.05);第9天时,B3组大鼠较B1组下降显著(P<0.05);第16天时,B3、B4组大鼠与B1组出现差异(P<0.05);第23天时,B2、B3、B4组均与B1组出现差异,以B4组差异显著(P<0.05)。6.在200倍光镜下的肝脏病理显示,模型组大鼠均存在肝细胞变性坏死、胆汁淤胆和肝纤维化,三种不同干预措施后以B4组改善肝细胞形态较为明显。7.综合上述在胆红素代谢、肝功能和肝纤维化指标改善方面,B2、B3、B4组三种干预措施均出现不同程度的改善,以B4组效果最好。结论1.通过ANIT溶液灌胃SD大鼠,成功建立亚急性肝内胆汁淤积肝纤维化动物模型;2.对于亚急性胆汁淤积模型鼠采用不同干预措施发现,各项干预措施均能改善模型大鼠的一般状态,以鼠李糖乳杆菌GG(ATCC 53103)干预措施最为显著;3.对于亚急性胆汁淤积模型鼠采用不同干预措施在改善胆红素代谢、肝功能指标方面发现,单一鼠李糖乳杆菌GG和联合熊去氧胆酸均具有较好干预效果,尤其后者为著,表明两种干预措施均具有较好的利胆和保肝作用;4.鼠李糖乳杆菌GG联合熊去氧胆酸治疗在改善亚急性胆汁淤积模型大鼠的肝脏纤维化方面,疗效很好,可有效保护胆汁淤积时肝脏功能,抵抗胆汁淤积所致肝纤维化作用;5.鼠李糖乳杆菌GG联合熊去氧胆酸发挥的治疗作用可能与重建胆汁淤积时肠道微生态平衡、维护肠道粘膜屏障功能、改变肠道胆汁酸代谢有关。