马尾藻多糖分离提取及其免疫药理学作用研究

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本论文以采自广西涠洲岛的马尾藻为原料,从马尾藻多糖的分离提取及其对小鼠和南美白对虾免疫功能影响等方面做了初步研究,以期为马尾藻资源的开发和利用提供科学依据。主要研究内容如下:马尾藻多糖的提取分别采用单一酒精浓度醇沉法,梯度酒精浓度醇沉法和添加101果汁澄清剂醇沉法三种方法,所得多糖做理化性质分析,用苯酚-硫酸法测定还原糖含量。通过腹腔注射马尾藻多糖溶液,用地塞米松制造免疫抑制模型,观察马尾藻多糖对小鼠胸腺指数,脾脏指数,酸性磷酸酶(ACP),溶菌酶,超氧化物歧化酶(SOD),黄嘌呤氧化酶(XOD),过氧化氢酶(CAT),一氧化氮水平(NO)和丙二醛(MDA)含量的调节作用;将马尾藻多糖拌入对虾饵料中,观察其对南美白对虾溶菌酶,超氧化物歧化酶,酚氧化酶活性(PO),酸性磷酸酶和存活率的影响。研究结果表明:1.理化性质分析、还原糖含量及急性毒性试验Molish试验结果表明马尾藻提取物含有多糖成分;碘-碘化钾反应显示提取物中不含淀粉;茚三酮反应表明提取物中无蛋白质和氨基酸存在;红外光谱可见在3420cm-1处有强吸收峰,峰型尖锐,为羟基伸缩振动吸收,在1030-1190cm-1处有吸收峰,且裂分为三重峰,为-C-O-C-O-C-基团的振动偶合,而羟基、-C-O-C-O-C-为多糖特征性结构基团,由此可推断提取物为较纯的马尾藻多糖;单一酒精浓度醇沉法马尾藻多糖得率为11.83%,纯化后含糖量为41.31%;梯度酒精浓度醇沉法产品得率低且质量较差;添加101果汁澄清剂醇沉法马尾藻多糖得率为7.97%,纯化后含糖量为68.76%。2.马尾藻多糖剂量在100mg/kg体重时,与生理盐水组比较能显著提高胸腺指数(P<0.05);马尾藻多糖剂量为50mg/kg体重时能显著对抗地塞米松的免疫抑制作用(P<0.05)。3.马尾藻多糖能对抗地塞米松的免疫抑制作用,提高免疫抑制小鼠血浆中溶菌酶含量。其中马尾藻多糖剂量为50mg/kg体重时可显著提高免疫抑制小鼠血浆中溶菌酶含量(P<0.05);马尾藻多糖剂量为100mg/kg体重时提高溶菌酶含量作用最明显(P<0.01)。4.马尾藻多糖能显著降低正常小鼠和免疫抑制小鼠血浆中ACP活力。其中三个剂量组(50,100或200 mg/kg)对正常小鼠血浆中ACP活力均有明显降低作用(P<0.01);马尾藻多糖剂量在100mg/kg和200mg/kg时,对免疫抑制小鼠血浆中ACP活力有显著降低作用(P<0.01)。5.马尾藻多糖在三个剂量组(50,100或200 mg/kg),均能显著提高正常小鼠脾脏总SOD活力(P<0.05),但对免疫抑制小鼠脾脏总SOD活力无显著影响。6.马尾藻多糖剂量在100mg/kg或200mg/kg体重时能显著降低免疫抑制小鼠胸腺匀浆中XOD活力(P<0.05),但对正常小鼠胸腺匀浆中XOD活力无显著影响;马尾藻多糖剂量在50mg/kg或100mg/kg体重时能显著降低免疫抑制小鼠脾脏匀浆中XOD活力(P<0.05),但对正常小鼠脾脏匀浆中XOD活力无显著影响。7.马尾藻多糖在剂量为200mg/kg体重时能提高正常小鼠和免疫抑制小鼠胸腺中NO含量(P<0.05);马尾藻多糖剂量在100mg/kg体重和200mg/kg体重时均对正常小鼠脾脏匀浆NO含量有提高作用(P<0.05);马尾藻多糖在三个剂量组(50,100或200 mg/kg),对免疫抑制小鼠脾脏匀浆NO含量也有提高作用(P<0.05)。8.马尾藻多糖剂量在50mg/kg体重和100mg/kg体重时能显著提高免疫抑制小鼠脾脏CAT活力(P<0.05),对正常小鼠脾脏CAT活力无显著影响。9.马尾藻多糖剂量在50mg/kg体重和100mg/kg体重时能够显著降低正常小鼠脾脏匀浆MDA含量(P<0.05),但对免疫抑制小鼠脾脏匀浆MDA含量无显著影响。10.马尾藻多糖在对虾饵料中的含量为2.0g/kg时可显著提高对虾ACP活性。11.马尾藻多糖在饵料中的含量为1.0、1.5或2.0g/kg时均能增强对虾PO活性,其中浓度(1.5 g/kg)和高浓度组(2.0g/kg)作用达极显著(P<0.01)。12.中浓度组(1.5 g/kg)能极显著地增强对虾SOD活性(P<0.01),高浓度组(2.0g/kg)可显著增强SOD活性(P<0.05)。13.马尾藻多糖在饵料中的含量为1.0、1.5或2.0g/kg时均有增强对虾溶菌酶活力作用,其中高浓度组(2.0g/kg)作用最明显(P<0.01),其它两组也有显著提高作用(P<0.05)。14.马尾藻多糖能显著提高染毒对虾存活率。
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