益肾活血丸改善子宫内膜容受性局部分子调控机制的研究

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目的:通过检测肾虚血瘀型PCOS患者子宫内膜中HOXA10、HOXA11、Wnt7a、LIF、整合素β3的表达量,从分子水平探讨子宫内膜容受性的建立机制,和经典Wnt/β-catenin信号通路调控子宫内膜容受性可能的下游靶基因以及益肾活血丸改善子宫内膜容受性的作用机理,为该药在临床上的应用提供理论研究基础。方法:病例选取于2014年1月-2014年12月就诊于广州中医药大学第一附属医院妇科门诊,经中医辨证属肾虚血瘀型的PCOS患者,排除治疗期间丢失例数、妊娠例数、未排卵例数及取子宫内膜量过少的例数,试验组实取内膜25例,对照组实取内膜23例,试验组中完成前后自身对照10例,对照组中完成前后自身对照8例。每组随机选取12例患者做前后自身对照,于治疗前排卵后7-10天,测量子宫内膜厚度,排除怀孕后刮取少量子宫内膜。试验组于月经周期第5天服克罗米芬50mg/d,连服5天,同时口服益肾活血丸6g, tid,至下次月经来潮,连用3个周期。对照组:于月经周期第5天服克罗米芬50mg/d,连服5天,同时服用肠溶阿斯匹林片75 mg/d至排卵日停服,月经周期第10天加服补佳乐1 mg/d,连服10天停药,连用3个周期。所有患者均彩超监测排卵,待排卵后7-10天,测量子宫内膜厚度,排除妊娠后刮取子宫内膜,用半定量RT-PCR、免疫组化法及western-blot法分别测定子宫内膜中HOXA10、 HOXA11、Wnt7a、LIF、整合素β3的表达量,计算两组患者治疗期间妊娠率,并对HOXA10、 HOXA11与Wnt7a相关性以及HOXA10、Wnt7a、LIF、整合素β3与子宫内膜厚度进行相关性研究,其结果用统计软件SPSS 17.0进行统计分析。结果:PCR、western-blot、IHC三种方法检测结果一致:1、HOXA10的表达:试验组与对照组PCOS患者经治疗后子宫内膜中HOXA10表达量均较治疗前明显升高,差异有统计学意义。治疗后两组间HOXA10表达量比较前者稍高于后者,差异无统计学意义。2、HOXA11的表达:试验组与对照组PCOS患者经治疗后子宫内膜中HOXA11表达量均较治疗前明显升高,差异有统计学意义。治疗后两组间HOXA11表达量比较前者稍高于后者,差异无统计学意义。3、Wnt7a的表达:试验组与对照组PCOS患者经治疗后子宫内膜中Wnt7a表达量均较治疗前明显升高,差异有统计学意义。治疗后两组间Wnt7a表达量比较前者明显高于后者,差异有统计学意义。4、LIF的表达:试验组与对照组PCOS患者经治疗后子宫内膜中LIF表达量较治疗前稍升高,差异无统计学意义。治疗后两组间LIF表达量比较前者稍高于后者,差异无统计学意义。5、整合素β3的表达:试验组与对照组PCOS患者经治疗后子宫内膜中整合素β3表达量均较治疗前明显升高,差异有统计学意义。治疗后两组间整合素β3表达量比较前者稍低于后者,差异无统计学意义。6. HOXA10与Wnt7a的相关性分析:相关系数r>0.8,P<0.05,两者有显著相关性.7、HOXA11与Wnt7a的相关性分析:相关系数r>0.8,P<0.05,两者有显著相关性.8、分别做HOXA10、Wnt7a、LIF、整合素β3与子宫内膜厚度相关性分析结果提示均未见相关性。结论:1、从形态学角度评价子宫内膜容受性时,综合子宫内膜厚度、内膜类型、内膜腺体、间质细胞及血流情况等指标结果更有意义。2、人的子宫内膜中HOXA11可能与HOXA10一样参与了子宫内膜容受性的建立。3、人的子宫内膜中Wnt7a和HOXA10表达量呈高度正相关性,Wnt7a和HOXA11表达量亦呈高度正相关性,推测Wnt7a可能通过经典Wnt/β-catenin信号通路,调控下游靶基因HOXA10、HOXA11的表达影响子宫内膜容受性。4、中成药益肾活血丸与西医补佳乐联合阿司匹林均可能通过提高肾虚血瘀型PCOS患者子宫内膜中HOXA10、HOXA11、Wnt7a、LIF、整合素β3的表达量,进而改善肾虚血瘀型PCOS患者子宫内膜容受性。
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