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有毒蓝藻水华及其引起的微囊藻毒素(Microcystins,MCs)污染对生态环境和人类健康带来的危害成已为全球关注的环境问题。水华水体中的MC可被水生动物摄取并积累到较高浓度。水产品作为人类的重要食物来源,其中的MC污染对人类健康的潜在威胁不容忽视。动物体内MC的提取效率在不同的组织器官中因样品基质、样品处理、提取溶剂、前处理净化步骤和检测方法的不同而有较大差异。目前尚未建立检测水产品中MC的标准方法,这给水产品中MC的安全性风险评估造成了困难。本文对HPLC和ELISA检测鱼肉中的MC方法分别进行了优化和可行性评估,并通过对提取回收率的研究,分析比较了样品处理、提取和净化各个环节及不同检测方法对检测结果的影响,为鱼肉中MC检测方法的选择和改进提供了依据。并在此基础上探讨了鱼肉中MC污染的生物安全性,对水产品的食用安全性评估提供参考和建议。主要结果如下:
1.对鱼肉中MC的HPLC检测和前处理过程进行了优化。比较分析不同色谱条件、提取剂、固相萃取(SPE)小柱、淋沈条件对检测的影响,确定了SPE-HPLC法检测鱼肉中MC的最优方案。优化的前处理步骤在保证了回收率(>92%)的同时有效降低了基质效应,对鱼肉中MC-LR和MC-RR的最低检测限达到0.1μg/g DW,定量限为0.3μg/g DW。鱼肉加标回收率实验中平行样的精密度(RSD%)小于12%。
2.用间接竞争酶联免疫法(Indirect competitive ELISA)对鱼肉样品中MC-LR的测定进行了研究。标准品在0.1~5.0μg/L范围内线性度R2>0.99;平行孔RSD%<10%。0.5g鱼肉干样经预处理后定容到1ml,样品的假阳性反应约相当于1 ng/ml。分析不同稀释倍数下的样品基质的假阳性对检测结果的影响表明,该方法对鱼肉中MC的检出限为2μg/L(0.004μg/g DW),定量限为5μg/L(0.01μg/gDW)。鱼肉样品建立的标准曲线与标样基本一致。该方法测定三个浓度下鱼肉粗提液中MC的回收率均大于96%,平行样之间的精密度小于15%。
3.以MC-LR为代表,用以上优化的两种检测方法研究了鱼肉干样和鲜样和鱼肝脏鲜样的回收率。对不同加标方法和孵育条件下的回收率进行了对比。鱼肉和肝脏鲜样的回收率均随加标量的减少而下降(从100%至30%),回收率与加标量呈对数相关性。同浓度下肝脏中回收率低于鱼肉。不同处理条件下回收率的结果表明,固相萃取的前处理步骤对回收率的损失小于6%,溶剂提取和加标孵育过程则是导致回收率下降的主要因为,推测与MC在样品中的同蛋白质发生共价结合以及降解有关。HPLC和ELISA两种方法的检测结果具有可比性,平均相对误差为6.8%。研究建议须对鱼肉及其他水产品中MC的检测方法进行更多研究和改进,才能为水产品的安全性评估提供可靠的依据。