【摘 要】
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目的:研究晚期糖基化终产物(AGEs)对体外培养的小鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGCs)凋亡及其受体(RAGE)表达的影响,探讨AGEs诱导SGCs凋亡的可能作用途径,分析老年性聋神经型的可能致病机制
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目的:研究晚期糖基化终产物(AGEs)对体外培养的小鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGCs)凋亡及其受体(RAGE)表达的影响,探讨AGEs诱导SGCs凋亡的可能作用途径,分析老年性聋神经型的可能致病机制。方法:取出生后3~5天C57BL/6J新生小鼠,利用切割分离+酶消化法分离出SGCs,并进行体外培养。将培养4天的SGCs用4%多聚甲醛室温固定30min,以小鼠源神经微丝蛋白抗体(NF-L+H)为一抗,按照免疫荧光法对所培养细胞进行免疫细胞荧光染色,对SGCs作出鉴定。以RAGE抗体为一抗,按照免疫荧光法及免疫组化法,对SGCs上的RAGE进行鉴定。将培养第4天的细胞加入不同浓度的AGEs,作用不同的时间,运用原位末端转移酶标记技术法(TUNEL法),在荧光显微镜下观察不同浓度、不同时间AGEs对培养的SGCs凋亡的影响。并采用采用实时荧光定量逆转录PCR(Real time RT-PCR)方法检测不同浓度、不同时间AGEs作用培养的SGCs后RAGE的mRNA的表达。结果:SGCs原代培养获得成功,经神经微丝蛋白抗体(NF-H)抗体免疫荧光法染色,其胞质及突起均呈阳性反应,染成绿色荧光。SGCs经RAGE抗体免疫细胞荧光法及免疫组织化学染色,其胞质及突起均呈阳性反应,分别染成绿色荧光及棕色表现。AGEs加入体外培养的SGCs中,可明显诱导SGCs凋亡,凋亡率与剂量、时间呈正相关。在发生凋亡的同时有RAGE mRNA表达的增强。结论:新生小鼠SGCs上即存在着RAGE,AGEs对SGCs有诱导凋亡的作用,该作用可能通过RAGE介导。AGEs促使SGCs凋亡可能是老年性聋神经型的发病机制之一。
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