胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤，世界范围内胃癌的年发病率为17.6/10万人。1993年第二次全国肿瘤死亡(1990-1993)抽样调查，在高死亡率的恶性肿瘤中胃癌仍占第一位。因此在我国胃癌的诊治及研究工作的任务显得尤为突出。胃癌的治疗强调的是综合治疗，首选手术治疗。进展期胃癌即使施以根治性切除，但由于亚临床转移灶的存在，仍有较高的肿瘤复发率。对于中晚期胃癌患者来说，五年生存率平均只有20％左右。目前正在寻求新的治疗方法改善预后。 恶性肿瘤的发生、发展与宿主的免疫状态密切相关，现代免疫学已证明肿瘤免疫主要由T细胞介导。目前大多数肿瘤患者未能产生令人满意的抗肿瘤效应，主要是存在肿瘤特异的免疫逃脱机制(immumologicalevasionstrategies)。肿瘤的免疫逃脱机制主要有免疫系统不能识别的抗原以及免疫抑制造成的肿瘤特异性T细胞数量减少和功能缺陷。目前肿瘤的免疫治疗的研究重点集中在打破免疫耐受和提高宿主的T细胞反应。近年来最令人瞩目的研究是揭示了CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatoryTcell，CD4+CD25+Tr)的存在。 在正常人和小鼠的外周血及脾脏组织的CD4+T细胞中约有5-10％的细胞持续高表达CD25分子(IL-2受体α链)，同时这一亚群细胞是CD45RB分子低表达。CD4+CD25+Tr具有免疫无能性和免疫抑制性两大功能特征。其免疫无能性表现在对高浓度IL-2的单独刺激、固相包被或可溶性抗CD3单抗以及抗CD3单抗、抗CD28单抗的联合作用呈无应答状态。CD4+CD25+Tr的免疫抑制性表现在经TCR介导的信号刺激后能抑制CD4+和CD8+T细胞的活化和增殖。 目前有关CD4+CD25+Tr细胞在临床的应用主要有两方面。一方面通过增强调节T细胞的活性，应用于自身免疫性疾病和移植排斥的治疗；另一方面，减少调节性T细胞的活性，可应用于肿瘤免疫治疗和特异性疫苗接种。在Tr删除的小鼠身上观察到多种自身免疫性疾病的发生，提示Tr在T细胞介导的自身免疫过程中扮演着十分关键的角色。而设法去除注射了同种基因的肿瘤细胞的小鼠身上的Tr，产生了十分有效的抗肿瘤效应。因此推断Tr的增强将可下调肿瘤特异的免疫效应。肿瘤环境中CD4+CD25+Tr比例增加，导致肿瘤免疫失调，去除这群细胞可有效诱导抗肿瘤免疫，这为肿瘤的治疗提出了一种崭新的思路。 本实验首先通过流式细胞术分析胃癌患者外周血中CD4+CD25+Tr的比例，并与健康对照组进行比较，从而探讨CD4+CD25+Tr与胃癌的分化程度及临床分期的关系；其次，用免疫磁性分离(magneticactivatedcellsorting，MACS)方法成功分选出胃癌患者外周血单个核淋巴细胞(PBMCs)中的CD4+CD25+Tr后，利用流式细胞术、细胞增殖试验、酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CD4+CD25+Tr的增殖、抑制及扩增能力。分别从细胞内和细胞外两种水平的细胞因子角度检测CD4+CD25+Tr的功能，探讨胃癌的发生、发展的分子免疫学和细胞免疫学的基础，为胃癌和其他消化道肿瘤的诊断和治疗寻找新的思路和方法，也可能为其他恶性肿瘤的免疫治疗提供重要的参考资料和理论基础。 第一部分胃癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测及临床意义 结论:1胃癌患者CD4+CD25+T细胞的比例显著高于健康对照组；2Ⅲ、Ⅳ期患者CD4+CD25+T细胞的比例显著高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者；3不同分化程度的胃癌患者CD4+CD25+T细胞的比例高低无明显差异。 第二部分人胃癌PBMCs中CD4+CD25+调节性T细胞的分选及鉴定 结论:1 MACS细胞分选系统能有效分选人PBMC中的CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞； 2 MACS系统分选后CD4+CD25+T细胞较分选前的CD4+CD25+T细胞纯度有明显升高，且分选后的细胞活力均超过97％； 3胃癌患者和健康对照组经MACS分选后CD4+CD25+T细胞的纯度及细胞活力间无显著差异。 第三部分人胃癌CD4+CD25+Tr细胞的体外功能研究 结论:1.无论是健康对照还是胃癌患者，CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞在体外足够的刺激条件下均可增殖；前者的增殖速度显著慢于后者(P＜0.05)；2.CD4+CD25+T细胞在体外可明显抑制CD4+CD25-T细胞的增殖及产生IFN-γ的能力，随着CD4+CD25+T细胞数目的逐渐增多，这种抑制能力逐渐增加(P＜0.01)；3.健康对照及胃癌患者CD4+CD25+T细胞分泌Th2样细胞因子IL-10、TGF-β均显著高于CD4+CD25-T细胞，而分泌Th1样细胞因子IFN-γ均显著低于CD4+CD25-T细胞(P＜0.01)。