论文部分内容阅读
一、载脂蛋白M增加小鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞的储备目的:利用载脂蛋白M(Apolipoprotein M,Apo M)基因敲除(Apo M-/-)小鼠和Apo M野生型(Apo M+/+)小鼠的动物模型,采用腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的实验方法,研究Apo M基因敲除对LPS诱导小鼠脾脏组织中CD3+T淋巴细胞,以及CD4~+和CD8+T淋巴细胞亚群的影响。方法:健康6-8周、雄性、SPF级的Apo M+/+和Apo M-/-小鼠,随机分成对照组、低剂量组和高剂量组,每组6只;每只小鼠按照对照组、低剂量组和高剂量组经腹腔分别注射100μl等体积0.9%生理盐水、5mg/kg或者10mg/kg的LPS溶液,连续3日,每天上午进行注射,于第4天进行取材;采用流式细胞技术分析小鼠脾脏组织中所含的CD3+、CD4~+、CD8+T淋巴细胞的构成及比例。结果:LPS刺激后,Apo M+/+和Apo M-/-两组小鼠脾脏组织中CD3+T淋巴细胞的百分数均较对照组显著降低(P<0.01和P<0.001)。然而,Apo M+/+和Apo M-/-两组小鼠脾脏组织中的CD3+T淋巴细胞百分数,在对照组和LPS刺激后均无统计学差异(P>0.05)。正常对照组Apo M-/-小鼠脾脏组织中CD4~+T淋巴细胞的百分数较Apo M+/+小鼠显著降低(P<0.01);LPS刺激后,Apo M+/+和Apo M-/-两组小鼠脾脏组织中CD4~+T淋巴细胞百分数均较对照组显著降低(P<0.001和P<0.001)。并且,5mg/kg和10mg/kg LPS刺激后Apo M-/-组小鼠脾脏组织中CD4~+T淋巴细胞的百分数均显著低于Apo M+/+组(P<0.05和P<0.01)。对照组和LPS刺激后,Apo M+/+和Apo M-/-两组小鼠脾脏组织中的CD8+T淋巴细胞百分数的变化无统计学差异(P>0.05)。尽管对照组Apo M+/+小鼠和Apo M-/-小鼠的CD4~+/CD8+T淋巴细胞的比值差异无统计学意义(P=0.0556),但5mg/kg和10mg/kg LPS刺激后Apo M-/-组小鼠脾脏组织中CD4~+/CD8+T淋巴细胞的比值均低于Apo M+/+组(P<0.01和P<0.01)。结论:载脂蛋白M增加小鼠脾脏组织中CD4~+T淋巴细胞的百分数,有利于脾脏CD4~+T淋巴细胞的储备,提高脾脏组织中CD4~+/CD8+T淋巴细胞的比值。二、载脂蛋白M维持机体的正常免疫反应可能与其增加脾脏CD4~+T淋巴细胞储备有关目的:利用载脂蛋白M(Apolipoprotein M,Apo M)基因敲除(Apo M-/-)小鼠和Apo M野生型(Apo M+/+)小鼠的动物模型,采用腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的实验方法,测定LPS刺激前和刺激后小鼠肝脏组织中TNF-α和MCP-1基因表达水平,以及血清中TNF-α和MCP-1蛋白表达水平。方法:健康6-8周、雄性、SPF级的Apo M+/+和Apo M-/-小鼠,随机分成对照组、低剂量组和高剂量组,每组6~9只;每只小鼠按照对照组、低剂量组和高剂量组经腹腔分别注射100μl等体积0.9%生理盐水、5mg/kg和10mg/kg的LPS溶液,连续3日,每天上午进行注射,于第4天进行取材;采用Real-time PCR或者Luminex x MAP液相芯片技术,测定LPS刺激前和刺激后肝脏组织中TNF-α和MCP-1基因表达水平,以及血清中TNF-α和MCP-1蛋白浓度水平。结果:Apo M+/+组和Apo M-/-组小鼠肝脏组织中TNF-αm RNA表达水平均较对照组显著升高(P<0.001和P<0.001);同样,Apo M+/+组和Apo M-/-组小鼠肝脏组织中MCP-1 m RNA表达水平均较对照组显著升高(P<0.01和P<0.001)。然而,同等剂量组间Apo M+/+组与Apo M-/-组小鼠比较,肝脏组织中TNF-αm RNA和MCP-1 m RNA的表达水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。Apo M+/+组小鼠血清TNF-α和MCP-1蛋白浓度水平较对照组显著升高(P<0.001和P<0.01);Apo M-/-组小鼠血清TNF-α和MCP-1蛋白浓度水平较对照组显著升高(P<0.05和P<0.05)。然而,Apo M+/+和Apo M-/-小鼠血清TNF-α蛋白浓度在对照组和低剂量组的差异均无统计学意义(P>0.05),在高剂量组Apo M-/-小鼠血清中TNF-α蛋白浓度较Apo M+/+小鼠显著降低(P<0.01);在对照组Apo M-/-小鼠血清MCP-1浓度较Apo M+/+小鼠显著升高(P<0.05);然而,在低剂量组和高剂量组Apo M+/+和Apo M-/-小鼠的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:载脂蛋白M可维持小鼠机体的正常免疫反应这可能与载脂蛋白M增加脾脏T淋巴细胞的储备有密切关系。三、载脂蛋白M可能通过增加小鼠脾脏VE-cadherin的表达提高其CD4~+T淋巴细胞的储备目的:利用载脂蛋白M(Apolipoprotein M,Apo M)基因敲除(Apo M-/-)小鼠和Apo M野生型(Apo M+/+)小鼠的动物模型,采用腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的实验方法,进一步测定LPS刺激前、后小鼠脾脏组织中部分粘附分子和趋化因子受体基因表达水平的变化。方法:健康6-8周、雄性、SPF级的Apo M+/+和Apo M-/-小鼠,各48只随机分成对照组、LPS注射后1h、3h、6h、12h和24h这六个时间观察终点,然后腹腔注射10mg/kg LPS(对照组采用腹腔注射0.9%生理盐水),然后取材小鼠的脾脏组织,每个时间点8只小鼠。采用Real-time PCR的方法,检测各个观察时间点脾脏组织中E-cadherin、VE-cadherin、S1PR1~5、CXCR3、CXCR4基因表达水平。结果:腹腔注射10mg/kg LPS后,Apo M+/+和Apo M-/-小鼠脾脏组织中E-cadherin和VE-cadherin的基因表达水平均随着时间的推移而显著降低(P<0.01和P<0.01);在各个观察时间终点,Apo M+/+和Apo M-/-小鼠脾脏组织中E-cadherin基因的表达水平无统计学差异(P>0.05),然而,Apo M-/-小鼠脾脏组织中VE-cadherin的基因表达水平在对照组、LPS注射后1h、3h、6h和12h均较Apo M+/+小鼠显著降低(P<0.05)。Apo M+/+和Apo M-/-小鼠脾脏组织中S1PR1、S1PR3和S1PR4基因表达水平均随着时间的推移而显著降低(P<0.01和P<0.01);在各个观察时间终点,Apo M+/+和Apo M-/-小鼠脾脏组织中S1PR1、S1PR2和S1PR3基因的表达水平均无统计学差异(P>0.05)。Apo M+/+和Apo M-/-小鼠脾脏组织中CXCR3和CXCR4的基因表达水平均随着时间的推移而显著降低(P<0.01和P<0.01);在各个观察时间终点,Apo M+/+和Apo M-/-小鼠脾脏组织中CXCR3和CXCR4基因的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:载脂蛋白M可能通过增加脾脏VE-cadherin表达,保护血管内皮细胞的完整性,从而提高脾脏组织中CD4~+T淋巴细胞的储备;CXCR3和CXCR4可能不参与小鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞的储备。