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背景我国HIV感染疫情形势依然严峻,感染正由高危人群向普通人群扩散,性传播己经成为主要传播途径。世界范围内预防控制HIV感染工作的首要任务是尽可能早期检测出感染人群,同时对早期感染人群进行有效的干预和治疗以防止HIV进一步传播,从而遏制HIV蔓延。HIV感染机体后可在外周血中首先检测到HIV RNA,检测血液中的HIV RNA已成为HIV早期诊断的重要辅助指标。急性感染者HIV RNA水平很高,即使样本稀释在大量集合中仍能检测到,为降低HIV RNA检测方法成本,可以将多个样本集合成一个样本后进行检测,找到HIV急性感染者。有些国家和地区已经将集合核酸检测纳入常规筛查中。目前COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR Test和Nuclisens EasyQ HIV-1是国内主要的两种病毒载量检测方法。国家艾滋病参比实验室建立了50份样本三阶段集合的COBAS检测方法,并在高危人群中检出“窗口期”感染者。EasyQ为新一代定量检测HIV-1方法,与COBAS比较具有简便、快速、试剂相对低廉等优点。当前国内大部分实验室都已建立了EasyQ检测方法,将EasyQ方法应用于HIV集合核酸检测,对于及时发现感染者等方面应用具有重要意义。目的评价用于HIV窗口期感染诊断的集合HIV RNA Nuclisens EasyQ检测方法；比较EasyQ与COBAS两种方法检测集合核酸的一致性和相关性；将集合HIV RNA Nuclisens EasyQ检测方法在HIV高危人群中进行初步应用,进行可行性尝试；为今后将集合HIV RNA Nuclisens EasyQ检测方法应用到实际工作中提供依据。研究方法1.取病毒载量拷贝数为千级、万级、十万级的RNA阳性样品,按照样品集合程序,分别与49份已知HIV核酸和抗体皆阴性的血浆样本形成一级集合,用HIV RNA Nuclisens EasyQ方法进行可重复性验证。2.分别取病毒载量拷贝数为千级、万级、十万级的定值血清和质控血浆样品,按照样品集合程序,分别与49份已知HIV核酸和抗体皆阴性的血浆样本形成一级集合,按照EasyQ的标准操作程序和COBAS超敏感操作程序分别检测,对两种方法的检测结果进行比较。3.用Nuclisens EasyQ HIV-1的标准操作程序,对德宏和佑安医院的10977份样品按照集合与分解程序进行检测。用COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR Test方法,对德宏感染者配偶和静脉吸毒(IDU)及佑安医院男男同性恋(MSM)的2426份样品按照集合与分解程序进行检测。4.实验数据采用SAS 8.2软件和Bland-Altman模型进行统计分析。结果1.集合HIV RNA Nuclisens EasyQ方法重复性验证中,样品病毒载量拷贝数为千级、万级、十万级的一级集合检测结果均为阳性,做单因素方差分析P=0.9634>0.05,可以认为操作的重复性良好。2.54份质控品一级集合经两种方法检测,结果均为HIV-1 RNA阳性。分析两种方法的相关性,结果EasyQ和COBAS的相关系数R为0.855,显示具有显著性意义(P<0.0001)和显著相关性。分析两种方法检测的一致性,EasyQ和COBAS检测结果的差值的平均值为0.038(SD=0.335),以mean±2SD计算两种方法的一致性检测限,有51份样本位于一致性检测限内,EasyQ与COBAS方法的一致性为94.44%(51/54),存在较高的一致性。采用配对t检验对EasyQ与COBAS两种方法的检测结果进行分析,结果显示,两种方法检测结果没有显著性差异(P>0.05)。3.本研究54份质控品集合中,原始样本病毒载量数量级为千、万、十万级各有18份。比较EasyQ与COBAS两种方法检测不同数量级病毒载量集合的相关性和一致性,结果显示均具有显著的相关性(相关系数R分别为0.832、0.873和0.866,P<0.0001)和较高的一致性(94.44%)。4.戒毒所、跨境婚姻、吸毒人群(IDUs)样本中未发现窗口期感染者,男男同性恋(MSM)样本中发现2例窗口期感染者,感染者配偶样本中发现1例窗口期感染者,VCT门诊样本中发现1例窗口期感染者,并追踪确认该感染者至HIV-1抗体阳转。5.两种方法都在2426份样本中找到3份窗口期感染者样本,3份窗口期样本的一集集合、二级集合及原始样本经EasyQ和COBAS检测均为阳性,其余样本一级集合均为阴性,两种方法检测结果一致。结论1.本研究建立了集合HIV RNA Nuclisens EasyQ检测方法,实验显示1：1,1：10,1：50的三阶段比例混合样本后做HIV RNA Nuclisens EasyQ检测是可行和可靠的,适合于手工操作。2. EasyQ方法检测集合样本HIV RNA与COBAS方法有很好的一致性和相关性,可以将集合HIV RNA Nuclisens EasyQ检测方法应用于发现窗口期感染者等方面。3.集合HIV RNA Nuclisens EasyQ检测方法具有很好的灵敏度,一级集合检测结果为32IU/ml时,仍能查到HIV RNA阳性的原始样品。