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本试验以苹果梨果实为试材,通过RT-PCR技术对苹果梨果实着色关键酶(PAL、CHI、UFGT)基因片段进行了克隆,并且采用半定量RT-PCR技术进行了三种酶基因在不同发育阶段的表达分析研究,以期为进一步探明梨果实着色的分子机理提供理论依据。结果如下：1.改良的CTAB法提取的苹果梨果皮总RNA出现明显的28s、18s、5s三条带,并且28s条带亮度是18s的2倍,提取RNA的OD260/OD280值均介于1.8-2.0之间,因此,改良的CTAB法是最理想的提取苹果梨果皮总RNA的方法。2.根据PAL、CHI、UFGT基因保守序列分别设计一对特异引物,以苹果梨果实cDNA为模板,分别扩增得到407bp、444bp、422bp的苹果梨PAL、CHI、UFGT基因cDNA片段,GenBank登录号分别为JN120855、JN120854、JN120856,长度分别为407bp、444bp、422bp,推断其分别编码128、148、131个氨基酸。3.同源性分析表明,PAL、CHI、UFGT基因序列与大多数已登录的园艺植物的这三种酶基因序列同源性都在90%左右,其中PAL基因与鸭梨PAL基因有97%的相似度、CHI基因与砂梨CHI基因有95%的相似度、UFGT基因与西洋梨UFGT基因有99%的相似度；相同氨基酸和相似氨基酸的百分比都在90%左右,相似性较高,说明已成功地克隆出苹果梨果实PAL、CHI、UFGT基因片段。4.系统进化分析表明,苹果梨、西洋梨、鸭梨PAL基因在进化上亲缘关系较近；苹果梨与西洋梨、砂梨CHI基因在进化上亲缘关系较近；苹果梨与西洋梨UFGT基因亲缘关系最近。5.半定量PCR结果表明,随着果实的成熟,套袋果与未套袋果PAL、CHI基因的表达量都不断增加,但套袋果在盛花后134天、143天以及147天的表达量明显高于未套袋果；UFGT基因在整个果实成熟过程中表达不稳定,但套袋果在盛花后125天与盛花后143天的表达量明显高于未套袋果,由此可见,套袋抑制PAL、CHI、UFGT基因的表达,去袋后,三种酶基因的表达量明显增加。