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背景葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症是人类最常见的遗传性酶缺陷疾病之一。我国南方地区被列为致病突变位点频率较高的地区。酶缺乏可导致新生儿高胆红素血症、急性溶血性贫血(AHA)和慢性非球形细胞溶血性贫血。G6PD缺乏症的新生儿胆红素脑病的发病率高,并可造成永久的神经损害,预后不良。目前诊断手段常为斑点杂交法或荧光定量分析法进行酶活性筛查,但对女性杂合子的诊断效能有限。基因层面的检测主要有一代测序法、新一代测序法以及荧光定量熔解曲线法等,但无法兼顾高准确性、高通量和低成本。目的本研究使用了一种建立在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)技术平台的检测G6PD缺乏症的方法,旨在研究中国人群常见的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症致病位点,并为建立新的快速检测方法提供基础研究及验证。方法本文根据现有的中国流行病学研究,包括专家共识及诊治指南等,选取了中国人群常见的16种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症致病突变位点,检测了共411例临床诊断为“葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症”患者的血样标本。提取核酸后,按照本实验设计的16个突变位点的对应引物,进行多重PCR以及单碱基延伸反应,通过飞行时间质谱检测突变位点。随后对全血标本以及未发现16种突变位点的干血片样本进行直接测序法验证。结果本实验检出纯合突变共279例,其中包括c.1388G>A(37.28%)、c.1376G>T(34.41%),c.95A>G(11.47%)。检出杂合突变共 86 例,其中 c.1376 G>T(46.51%)、c.1388G>A(31.40%),c.95A>G(11.63%)。另外鉴定出复合突变共19例,主要为c.1388、c.1376杂合(52.63%)。本文检测出的位点情况符合我国的流行病学调查。此外本文对207例全血样本进行了一代测序法分析验证表明质谱分析准确率为100%,其中5例判定为阴性的全血样本中未能检出突变位点,考虑可能为酶活性筛查假阳性。对22例干血片样本中判定为阴性的样本进行一代测序,证实不属于本文设计的16种突变位点。本实验的质谱检测和一代测序检测符合率为100%。结论本论文使用的基于多重PCR技术以及飞行时间质谱技术的热点突变检测方法,具有高通量、高效率、高准确率和成本低的特点,可以在基因层面诊断葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症,可提高临床诊断准确率,避免出现漏诊。同时也为其他多位点、有热点基因病提供新的检测思路。