本实验构建了重组人ICOS胞外区的原核表达载体,进行了重组ICOS蛋白的表达与纯化,并将其作为抗原免疫小鼠。根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区单链基因,并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区双链基因,将ICOS胞外区双链基因插入到原核表达载体pET-28a中,对重组质粒进行鉴定。转化E.coli BL21(DE3), IPTG诱导表达目的蛋白。通过包涵体变复性纯化目的蛋白,并通过Western blot鉴定目的蛋白。后将目的蛋白作为抗原免疫小鼠。结果获得ICOS双链基因大小为757 bp,构建的重组表达载体中目的基因序列完全正确。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析和Western blot鉴定表明目的蛋白在E. coli BL21 (DE3)中高效表达,相对分子质量约为31KD,与预期结果相符。免疫小鼠后得到较高的抗血清效价。检测结果表明：成功地构建人重组ICOS胞外区的原核表达载体,并实现了在大肠杆菌中大量表达。为下一步制备抗ICOS单链抗体奠定了基础。