论文部分内容阅读
血管紧张素转化酶抑制肽(ACEI)是一类可抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性的功能多肽,从酶解体系中分离纯化降血压肽是一项十分耗时的繁琐过程。近年出现的固定化金属离子亲和层析(MAC)技术是利用金属离子与蛋白的螯合作用分离目标蛋白,虽然具有分离操作简便、处理量大、快速等优势,但在实际应用中,由于金属离子与非目标大分子的非特异性吸附,导致特异性结合位点的下降,分离效率降低。为提高固定化金属离子亲和介质的分离效率,本文采用共沉淀法制备磁流体,通过乳液交联法制备壳聚糖磁性微球作为亲和载体,采用醛基化聚乙二醇单甲醚(mPEG-CHO)进行修饰,螯合铜离子(Cu2+)制备mPEG修饰固定化金属铜离子亲和介质(mPEG@IMAM@Cu2+),以牛血清白蛋白(BSA)作为模型大分子,α-乳清蛋白水解体系获得的降血压肽缬氨酰-丝氨酰-亮氨酰-脯氨酰-谷氨酰-色氨酸(VSLPEW)作为模型活性多肽。研究mPEG@IMAM@Cu2+在混合体系中对ACEI活性肽的分离效果,具体内容如下：以共沉淀法制备的Fe304为磁核,分别以戊二醛、环氧氯丙烷为交联剂,采用乳液交联法制备了戊二醛交联、甲醛预交联环氧氯丙烷交联两种壳聚糖磁性微球(MCS、FEMCS),并对MCS、FEMCS的相关性能进行表征。对两种微球进行活化,引入环氧基。以活化微球为基体,制备相应的固定化金属铜离子亲和介质(MAM@Cu2+)。以mPEG-CHO为原料,对固定化金属Cu2+亲和介质(MAM@Cu2+)进行mPEG修饰改性,制备mPEG@IMAM@Cu2+。以BSA的吸附量与吸附阻拒率为指标,优化了制备了mPEG@IMAM@Cu2+,最佳工艺为：MCS为基体,配基密度为69μmol·g-1左右,反应时间为20h,反应温度为40℃,ncHO:n-NH2为4：1,所得mPEG@IMAM@Cu2+相比相应的MAM@Cu2+,对BSA吸附量为22.8mg·g-1,对BSA的吸附阻拒率为37.4%左右。最后,研究mPEG@IMAM@Cu2+对VSLPEW的吸附动力学,在BSA与VSLPEW混合体系中对VSLPEW的吸附及对BSA的阻拒效果。结果表明：mPEG@MAM@Cu2+对VSLPEW吸附动力学模型为伪二级动力学模型。在一定条件下,mPEG@MAM@Cu2+相比MAM@Cu2+不仅对混合体系中的大分子BSA具有阻拒效果,也能提升对VSLPEW的特异性吸附。