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背景miRNA是近年来发现的一类具有高度保守型的内源性、非编码小RNA分子,长约18-25 nt,可参与细胞增殖、分化、胚胎或个体的生长发育、组织器官分化、疾病的发生发展等几乎所有生理或病理过程,并在机体免疫调节过程发挥重要作用。miRNA通过与机体中一些蛋白质形成RNA诱导的沉默复合体,从而促进靶基因RNA的降解,或者导致靶基因翻译水平的阻碍,进而调节基因的表达。miRNA在机体固有免疫过程中发挥极其重要的作用,对很多细胞因子、炎症反应有重要的调节作用。既往研究表明miR-34b-5p可通过靶向前颗粒蛋白而减轻脂多糖诱导的急性肺损伤和抑制细胞凋亡,但mi R-34b-5p在金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)感染炎症反应过程中的作用尚未阐明。目的通过研究金黄色葡萄球菌刺激的巨噬细胞中miR-34b-5p的表达量,并在巨噬细胞中过表达或低表达miR-34b-5p,探讨miR-34b-5p在炎症反应中的作用以及可能的分子机制,并为金黄色葡萄球菌感染的炎症反应提供可能的治疗靶点。方法1.使用金黄色葡萄球菌刺激RAW264.7巨噬细胞,通过qPCR技术检测其miR-34b-5p的表达量,分析miR-34b-5p表达量的规律;在巨噬细胞中转染模拟物或抑制剂使miR-34b-5p过表达或低表达,再使用金黄色葡萄球菌感染,通过qPCR实验检测其炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表达量;2.通过Target Scan在线软件预测miR-34b-5p与下游靶基因结合,选取PTEN作为下游靶基因;通过双荧光素酶报告基因验证miR-34b-5p和PTEN的靶向结合关系,通过qPCR与Western blot检测过表达或低表达miR-34b-5p对PTEN表达量的影响;3.将巨噬细胞分为NC组(转染miR-NC)、miR-34b-5p组(转染miR-34b-5p模拟物)、anti-NC组(转染mi R-34b-5p抑制剂的阴性对照)、anti-miR-34b-5p组(转染mi R-34b-5p抑制剂)、miR-34b-5p+pc DNA组(转染mi R-34b-5p模拟物和pc DNA-NC)、miR-34b-5p+PTEN组(转染miR-34b-5p模拟物和pcDNA-PTEN),qPCR与Western blot检测转染后金葡菌刺激的巨噬细胞中PTEN的表达量以及IL-6、TNF-α、IL-1β的表达量。结果1.miR-34b-5p在S.aureus刺激的RAW264.7巨噬细胞中的表达量显著高于对照组(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-34b-5p组巨噬细胞中miR-34b-5p显著过表达,并促进炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表达量(P<0.05);在巨噬细胞中转染anti-miR-34b-5p后,miR-34b-5p的表达量降低,IL-6、TNF-α、IL-1β也显著低表达(P<0.05);2.双荧光素酶报告基因实验证实miR-34b-5p可靶向结合PTEN;与NC组相比,过表达miR-34b-5p显著降低PTEN的表达量(P<0.05);与anti-NC组相比,低表达miR-34b-5p显著提高PTEN的表达量(P<0.05);3.miR-34b-5p+PTEN组巨噬细胞PTEN的表达量较mi R-34b-5p+pc DNA组显著增加,而IL-6、TNF-α、IL-1β的表达量显著降低(P<0.05)。结论miR-34b-5p在金黄色葡萄球菌刺激的巨噬细胞中表达量上调,通过靶向PTEN调控巨噬细胞的炎症反应。