论文部分内容阅读
烟草普通花叶病作为烟草生产上的主要病害,普遍发生在全世界的各个烟区,对烟叶生产造成了严重的威胁,给整个烟草行业带来了巨大的损失。目前,烟草普通花叶病还没有较好的防治措施,最经济有效的对策是选育抗病品种。烟草普通花叶病的病原是烟草花叶病毒（Tobacco Mosaic Virus,TMV）,N基因是目前主要的抗病基因。本研究以高抗TMV烤烟品种Coker176和易感TMV烤烟品种Y3以及它们的BC1F1群体为试材（Y3是回交亲本）,采用分离集团分组分析法（Bulked Segregation Analysis,BSA）和简单序列重复（Simple Sequence Repeat,SSR）标记技术,筛选了18764对SSR引物,旨在获得与烟草TMV抗性基因N紧密连锁的共显性标记并应用于选育含N基因烤烟的标记辅助选择。主要结果如下:1)烟草基因组SSR标记多态性的筛选:利用18764对引物对Y3、Coker176、F1、感病池和抗病池共5份材料进行PCR扩增,结果显示在5份供试材料中能进行有效PCR扩增的SSR引物为18570对（99%）,在双亲间有差异且在F1上呈共显性的标记仅有396个,表明SSR标记在Y3和Coker176之间的多态率很低,仅有2.11%（396/18764）。该结果与已报道的研究相吻合:普通烟草（尤其大面积种植的烤烟）间遗传基础狭窄、亲缘关系较近、遗传多样性较低。2)抗性连锁标记的获得:采用分离集团分组分析法（Bulked Segregation Analysis,BSA）对已筛选获得的396个多态性SSR标记与目的基因（N）进行遗传连锁分析,结果仅获得1对SSR引物（TM508-007）扩增出的条带与TMV抗性基因N紧密连锁。利用Joinmap 4.0作图软件,分析该标记（TM508-007）在123个BC1F1单株中基因型并计算出其与烟草TMV抗性基因N的连锁距离约为0.41 cM。3)抗性连锁标记的验证:利用16份遗传背景不同、TMV抗性和基因型已知且抗性来源不同的烤烟为材料,对本研究已获得的TMV抗性连锁标记（TM508-007）进行了有效性验证。16份烤烟材料的基因型分析结果不仅与田间TMV抗性鉴定结果相吻合,而且还能清晰的区分出烤烟材料中纯合抗性、杂合抗性。表明该标记与目的基因N紧密连锁,且具有检测的稳定性、可靠性和高效性,是一个比较理想的共显性标记。本研究获得的与TMV抗性基因N紧密连锁的共显性SSR标记丰富了烟草抗TMV分子标记的数量和种类,可用于烟草抗TMV（含N基因）分子标记辅助选择。4)抗性连锁标记的应用:利用标记TM508-007进行辅助选择育种,结合田间主要农艺性状观察统计,筛选到了18株基因型为抗病纯合且综合性状较好的优良抗病单株。将这18株抗性单株继续回交收种,可进一步用于抗病育种选择。