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目的本研究的主要目的是利用IRBP1-20抗原诱导的自身免疫性葡萄膜炎疾病模型来研究TIPE2在自身免疫性葡萄膜炎发病过程中的作用,并分别从细胞水平和分子水平探讨TIPE2在此过程中的作用机制,从而为建立靶向TIPE2来控制炎症反应的新方法提供理论基础。方法1.构建EAU模型,并在野生型和TIPE2缺失C57BL/6小鼠中诱导EAU,并根据小鼠眼球病理改变来判断建模是否成功。2.野生型和TIPE2缺失C57BL/6小鼠中诱导EAU,通过比较小鼠眼球切片病理改来探讨TIPE2是否在自身免疫性葡萄膜炎病的发生和发展中起作用。3.研磨颈部引流淋巴结和I型胶原酶消化眼球组织,计数,并用IRBP、α-328刺激胞48h后ELISA方法检测炎症因子IFN-r和IL-17A的表达。4.计算并比较两组小鼠的脾脏重量和体重的比例。5.对颈部引流淋巴结、眼球组织细胞进行细胞表面染色,并用流式细胞仪检测CD4、CD8a、CD11b、CD11c及F4/80阳性的免疫细胞百分比。6.颈部淋巴结T细胞的活化标记CD62L的表达情况从而确定TIPE2抑制自身免疫性葡萄膜炎发生和发展的细胞机制。7.通过利用细胞内染色技术比较野生型小鼠和TIPE2缺失小鼠T细胞磷酸化IκBα的表达,NF-κB抑制剂Bay处理α-328刺激的T细胞,检测炎症因子IL-17A的表达,从而确定TIPE2抑制自身免疫性葡萄膜炎发生和发展的分子机制。8.研磨颈部引流淋巴结,得到淋巴结细胞悬液,用α-CD328刺激细胞后RT-PCR方法检测TIPE2 m RNA的表达情况。结果1.通过IRBP(IRBP1-20简称)抗原皮下注射可以诱导出自身免疫性葡萄膜炎疾病的病理变化,该实验结果也意味着我们在背景为C57BL/6小鼠中自身免疫性葡萄膜炎病建模成功。2.利用IRBP抗原皮下注射诱导的小鼠EAU模型,行眼球石蜡包埋病理切片并HE染色后,结果显示TIPE2缺失的小鼠HE炎症评分更高,患EAU的发病程度较野生型更严重(P<0.05)。该实验结果说明TIPE2能下调自身免疫性葡萄膜炎病的发生和发展。3.通过ELISA比较野生型和TIPE2缺失小鼠在诱导自身免疫性葡萄膜炎后T细胞中炎症因子的产生,发现TIPE2缺失小鼠在颈部引流淋巴结、眼球T细胞及IRBP特异性T细胞产生的炎症因子IL-17A更多,差异有统计学意义(P<0.05),IRBP特异性T细胞产生的炎症因子IFN-r同样增多,差异有统计学意义(P<0.05),但是两组表达的α-CD(3+28)刺激后的IFN-r差异无统计学意义(P>0.05)。4.通过比较野生型和TIPE2缺失小鼠的脾脏重量与体重比,发现两者差异无统计学意义(P>0.05)。5.利用流式细胞分类技术比较野生型小鼠和TIPE2缺失小鼠在诱导自身免疫性葡萄膜炎病后淋巴结和眼球中免疫细胞(CD4、CD8a、CD11b、CD11c、F4/80)的比例,结果显示TIPE2缺失小鼠在颈部引流淋巴结及眼球处的免疫细胞(CD4、CD8a、CD11b、CD11c)差异无统计学意义(P>0.05)。TIPE2缺失小鼠在眼球处的F4/80+巨噬细胞却比野生型增多,差异有统计学意义(P<0.05)。6.利用流式细胞分类技术比较野生型小鼠和TIPE2缺失小鼠在发病后CD4阳性T细胞的活化,结果显示TIPE2缺失的小鼠T细胞CD62L表达较野生型降低(P<0.05)。7.利用细胞内染色和流式细胞分类技术比较野生型小鼠和TIPE2缺失小鼠T细胞中IκBα的磷酸化水平,结果显示TIPE2缺失小鼠T细胞的IκBα磷酸化水平显著增加(P<0.05)。NF-κB抑制剂Bay处理α-328刺激的T细胞后,炎症因子IL-17A的表达无明显差异(P>0.05)。8.通过RT-PCR方法检测α-CD328刺激T细胞后TIPE2 m RNA的表达情况,结果显示TIPE2缺失小鼠T细胞的TIPE2 m RNA水平显著降低(P<0.05)。结论TIPE2通过抑制IκBα的磷酸化从而抑制T细胞的活化来下调眼球中炎症因子的产生,最终抑制自身免疫性葡萄膜炎的发生和发展。