马铃薯非共生血红蛋白基因StHb1的克隆、表达及功能分析

来源 :河北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:phoebus
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
马铃薯晚疫病是一种由致病疫霉真菌引起的世界性流行病害,可以导致马铃薯茎、叶和块茎等组织的坏死腐烂,严重影响其品质及产量。目前,防治该病害最具有前景的方法是筛选高效稳定的抗性基因并利用基因工程手段培育晚疫病抗病品种。本研究利用半定量RT-PCR、亚细胞定位等手段对马铃薯非共生血红蛋白基因StHb1与马铃薯晚疫病之间的相关性进行了初步探讨,主要包括以下几个方面:(1)利用RT-PCR技术,对马铃薯StHb1基因在不同抗性品种各组织部位中的表达情况进行了研究,结果表明其表达具有组织特异性,其中在马铃薯块茎中表达量最高,其次为根(感性品种荷兰十五)或茎(抗性品种陇薯三号)组织,而在叶和花中几乎没有表达。(2)利用致病疫霉游动孢子悬液、H2O2和SNP(NO供体)侵染马铃薯抗、感病品种的块茎组织,半定量RT-PCR分析发现,StHb1基因的表达在抗性品种和感性品种块茎组织中均受致病疫霉的侵染所抑制;外源NO和H2O2的作用亦可明显地抑制StHb1基因的表达,但在抗性品种中该基因受抑制的程度低于感性品种。(3)根据StHb1基因开放阅读框序列设计引物扩增StHb1基因cDNA序列,成功构建了StHb1基因与绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pBI121-StHb1-GFP。利用农杆菌介导法将重组载体转化洋葱内表皮细胞,通过荧光显微镜观察融合蛋白的瞬时表达以确定StHb1蛋白在细胞内的分布。结果表明StHb1-GFP融合蛋白主要分布于细胞核中,亦有少量分布于细胞质中。(4)将StHb1基因连接载体pET-17b,成功构建了该基因的原核表达载体pETHb。经1.0mmol/LIPTG诱导3h,SDS-PAGE电泳显示成功诱导出27.6KD大小的蛋白产物。(5)成功构建了植物超表达载体pBI121-StHb1与反义表达载体pBin438-StHb1。
其他文献
  Objectives: Some literatures had approved that using computer assisted navigation in the temporomandibular joint ankylosis(TMJA)treatment could reduce the r
会议
  The treated infectious root canals was considered with residual bacteria in the canal after treatment.Enterococcus faecalis was one of the most commonly iso
会议
本文通过对荣华二采区10
热管理问题是高超音速飞行器需要考虑的重要问题之一,采用碳氢燃料进行主动冷却是最有应用前景的技术之一。本文建立了研究高密度碳氢燃料在模拟冷却通道内热裂解与积炭的方
目前,国际上公认和普遍采用的原核生物分类系统是根据16S rRNA序列同源性建立的系统发育体系。在当前的分类系统中,高等级分类阶元的界定尚无明确标准,主要依据其能否在16S rRNA
突触是怎样形成的?突触蛋白是如何运输和组装的?这些问题是在今天神经生物学中最重要的问题之一。神经元胞体是细胞代谢中心,突触的形成需要大量的相关蛋白和突触小泡,需在胞内合
  Objective: Try to explore and establish a new assessment method via digital microscope in aided diagnosis,the laser treatment energy parameters were set and
会议
学位
近年来,从拟盘多毛属植物内生真菌中分离得到许多种类多样,结构新颖且具有多样生物活性的次级代谢产物,如抗癌物质(紫杉醇和粗榧酸)和抗菌物质(环己烷类物质、粗榧酸和pestaloside),是潜力巨大、尚待开发的新天然产物来源。本论文对两株拟盘多毛孢属内生真菌的次级代谢产物进行了研究,并对分离得到的部分化合物进行了初步的生物活性测试。试验综合采用正、反相硅胶柱色谱,制备型薄层色谱,Sephadex L
  Concentrations of eight heavy metals(As,Cd,Cr,Cu,Hg,Ni,Pb,and Zn)were measured on 92 topsoil samples collected from agricultural areas in the city of Daye i