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目的:利用人卵巢癌临床病理标本、IL-17A缺陷小鼠(IL-17A-/-小鼠,deficient)及小鼠卵巢癌细胞系等系统地探讨外源性和内源性IL-17A(Interleukin-17A)对卵巢癌(ovarian cancer,OVCA)网膜转移的影响及其机制,旨在为控制卵巢癌转移提供实验依据。方法:1.收集60例不同FIGO分期的上皮性OVCA(epithelial OVCA,EOC)患者的病理组织标本,采用IHC法分析IL-17A表达与肿瘤转移相关分子MMP2和MMP9、脂肪分解相关分子HSL和脂肪酸转运相关分子FABP4的表达及与患者临床进展等的相关性。2.应用Western Blotting法检测人OVCA细胞系A2780(人卵巢腺癌细胞)、OVCAR3和SKOV3(人卵巢腹水腺癌细胞)和小鼠OVCA细胞系ID8(C57BL/6背景)中IL-17A受体(IL-17RA)的表达。3.应用MTT法检测人重组白细胞介素-17(rh IL-17A)或小鼠重组白细胞介素-17(rm IL-17A)对A2780、OVCAR3、SKOV3和ID8细胞增殖的影响。4.应用细胞划痕实验检测rm IL-17A对ID8细胞迁移能力的影响,并以IL-17RA中和抗体(IL-17RA m Ab)进行相应的封闭实验。5.应用Transwell小室(8.0μm)侵袭实验检测rm IL-17A和/或小鼠原代网膜脂肪细胞对ID8细胞侵袭能力的影响,并分别以IL-17RA m Ab或FABP4抑制剂BMS309403进行相应的封闭实验。6.应用Western Blotting法检测不同剂量rh IL-17A处理不同时间对A2780和OVCAR3细胞中MMP2、MMP9、HSL和FABP4表达的影响。7.应用Western Blotting法检测人乳腺癌(MDA-MB-231,MCF-7,T47D,SK-BR-3),肺癌(H1299,H1752,H460,A549),肝癌(SK-HEP-1,BEL-7402,Hep G2,Hep3B)等细胞中IL-17RA的表达;检测rh IL-17A(1ng/ml,处理6h)对上述细胞中MMP2、MMP9、HSL和FABP4表达的影响。8.应用Western Blotting法检测rh IL-17A对A2780和OVCAR3中相关信号分子PPAR-γ和STAT3 705位点Tyr磷酸化水平(p-STAT3)表达的影响。9.应用MTT法检测STAT3抑制剂stattic对A2780和OVCAR3细胞的IC50。10.应用Western Blotting法检测rh IL-17A对A2780和OVCAR3细胞中MMP2、MMP9、HSL、FABP4和STAT3信号通路因子p-STAT3表达的影响,并以stattic进行相应的封闭实验。11.以C57BL/6野生型(wild type,WT)、IL-17A缺陷型(IL-17A-/-)小鼠和小鼠卵巢癌细胞系ID8建立小鼠OVCA腹腔种植瘤动物模型,观察内源性IL-17A对腹腔内成瘤和转移的影响。并应用IHC技术分析肿瘤组织中MMP2、MMP9、HSL和FABP4的表达。结果:1.60例不同FIGO分期的卵巢癌病理组织标本中,IL-17A的表达与卵巢癌患者的肿瘤恶性程度和转移情况呈正相关(P=0.012);IL-17A的表达与MMP2、MMP9、HSL和FABP4蛋白表达呈正相关(P=0.017)。2.人OVCA细胞系A2780、OVCAR3、SKOV3和小鼠OVCA细胞系ID8均表达IL-17RA。3.rh IL-17A或rm IL-17A对A2780、OVCAR3、SKOV3和ID8细胞的增殖无显著性影响(P>0.05)。4.rm IL-17A可以促进ID8细胞的迁移活性,并且以IL-17RA m Ab进行阻断实验可消除由rm IL-17A促进的ID8细胞迁移。5.rm IL-17A可以促进ID8细胞的侵袭能力,IL-17-/-小鼠和WT小鼠的网膜原代脂肪细胞对ID8细胞的侵袭能力均有促进作用,但WT小鼠脂肪细胞的促侵袭活性明显强于IL-17-/-小鼠;加入rm IL-17A后,可进一步增强WT小鼠脂肪细胞对ID8细胞的侵袭能力的活性作用并且分别以IL-17RA m Ab和BMS309403进行阻断实验均可消除由rm IL-17A加剧的ID8细胞的侵袭性。6.rh IL-17A(1ng/ml,处理6h)可显著增加A2780和OVCAR3细胞中MMP2、MMP9、HSL和FABP4的蛋白表达。7.人乳腺癌(MDA-MB-231,MCF-7,T47D,SK-BR-3),肺癌(H1299,H1752,H460,A549),肝癌(SK-HEP-1,BEL-7402,Hep G2,Hep3B)细胞均表达IL-17RA且无显著性差异(P>0.05);它们均表达MMP2和MMP9,并且rh IL-17A可促进MMP2和MMP9蛋白表达。只有人卵巢癌细胞A2780和OVCAR3强表达FABP4与HSL,并且rh IL-17A可促进A2780和OVCAR3的FABP4和HSL蛋白表达。8.rh IL-17A仅促进A2780细胞的PPAR-γ蛋白表达而对OVCAR3细胞无影响;rh IL-17A可促进A2780和OVCAR3细胞的p-STAT3蛋白表达。9.stattic对A2780和OVCAR3细胞的IC50分别为3.499μM和2.538μM。10.rh IL-17A可以促进A2780和OVCAR3细胞中MMP2、MMP9、HSL、FABP4和STAT3信号通路因子p-STAT3蛋白的表达,并以stattic进行阻断实验仅可消除由rh IL-17A引起的A2780和OVCAR3细胞中FABP4蛋白表达水平的增加,而对rh IL-17A引起的A2780和OVCAR3细胞中HSL、MMP2、MMP9蛋白表达水平的增加无影响。11.内源性IL-17A可显著减少WT小鼠的生存时间,并且促进小鼠腹腔内成瘤。WT小鼠肿瘤组织中MMP2、MMP9、HSL和FABP4均呈强阳性表达,IL-17-/-小鼠肿瘤组织中MMP2、MMP9、HSL和FABP4呈弱阳性表达。结论:本研究通过卵巢癌临床标本分析、体外实验和动物实验,揭示IL-17A可与卵巢癌细胞上的IL-17RA结合,促进MMP2、MMP9、HSL和FABP4的表达,并可通过激活STAT3信号通路上调FABP4的表达,使卵巢癌细胞向网膜脂肪组织趋化,进而促进卵巢癌细胞发生网膜转移。这也提示IL-17A和FABP4可能成为改善卵巢癌网膜转移的靶点,该结果可为临床治疗OVCA提供新的策略。