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目的:丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)是从丹参中分离得到的一个二萜类化合物,目前对于其活性的研究尚未见报道。中药中抗癌活性成分是当今抗肿瘤研究的热点。本实验用MTT比色法筛选丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)对肿瘤细胞的抑制作用,结果显示其有较好的抗肿瘤活性,并进一步研究丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)对人急性早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60的细胞增殖的抑制作用及其作用机制,探讨其抗肿瘤机制,期望能为抗肿瘤药物的研发及其临床应用提供理论依据。 方法:采用MTT比色法检测了丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)对人急性早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60,人肝癌细胞株HepG2,人乳腺癌细胞株MCF-7、人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和人正常纤维细胞Hs68的细胞增殖的抑制作用。PI染色流式细胞术检测丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)对人白血病细胞株HL-60细胞周期的影响;膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染进行流式细胞仪分析,检测丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)诱导人白血病细胞株HL-60细胞的调亡作用;应用荧光染料JC-1单色标记法使用流式细胞仪检测HL-60的细胞线粒体膜电位的改变;蛋白印迹分析丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)对丝裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路中p38,ERK,JNK磷酸化活化的作用。 结果:MTT比色法显示丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)对人急性早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60,人肝癌细胞株HepG2,人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231和人正常纤维细胞Hs68的细胞增殖的均有抑制作用,并随着浓度的增加抑制率增高。丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)对HL-60的细胞增殖抑制明显,IC50为45μmol/L,其次抑制MDA-MB-231的细胞增殖作用明显,IC50为67μmol/L,抑制MCF-7细胞增殖的 IC50为128μmol/L,对HepG2细胞增殖的抑制作用不明显,IC50为253μmol/L;对Hs68的IC50为272μmol/L,说明丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)对人正常纤维细胞的毒副作用较小。流式细胞仪分析结果表明丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)能使HL-60细胞从G0/G1进入S期,并使其阻滞在S期,诱导细胞在S期发生调亡,并检测到HL-60细胞线粒体膜电位的降低;western blot分析丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)通路中关键信号,p38MAPK磷酸化蛋白表达增加,ERK(1/2)磷酸化蛋白表达减少,未活化JNK。 结论:(1)丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)对人白血病细胞株HL-60,人肝癌细胞株HepG2,人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231和人正常纤维细胞Hs68的细胞增殖均有抑制作用;随着药物浓度的增加,抑制细胞增殖的作用增强。丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)对HL-60细胞增殖的抑制作用最为明显,对人正常纤维细胞Hs68的毒副作用小。(2)丹参降鼠尾草氧化物(Przewalskin)可阻滞HL-60于S期,诱导细胞调亡,使HL-60细胞的线粒体膜电位的降低;其作用机制可能是激活MAPK信号转导通路中p38有丝分裂原激活蛋白激酶,抑制ERK1/2的表达。