前言 肺癌是发病率和死亡率增长最快的，对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。世界上每年因为肺癌死亡的人口约90多万人，居各种恶性肿瘤之首，然而我们临床工作中，经常面临肺部病灶其性质难确定，而痰中查找肿瘤细胞及病理活检又有一定的难度，因而要求一种有效、简便的诊断方法。端粒酶可作为一种肿瘤标记物已在多组研究中被证实。端粒酶有三部分组成，hTERT是端粒酶的催化亚单位(反转录酶)，在端粒酶的表达中起限速作用，是一种RNA酶，在细胞的永生化过程中伴有hTERT的表达和端粒酶活性的上调，hTERT的表达水平可以反映端粒酶的活性高低。多组研究证实hTERT在癌变的早期已有表达，且与肿瘤的发生有密切关系。而且其表达不仅存在于组织中，外周血也同样存在表达，本研究检测了31例肺癌和18例良性肺部病变患者及11例正常人的外周单个细胞hTERTmRNA的表达。以期提高肺癌诊断的水平和提供一种简便的方法。 实验对象 随机选取2003年6月至10月在中国医科大学第二临床医院住院肺癌及良性肺部病灶患者49例，并根据最终临床、生化、病理诊断分为肺癌组与良性肺部病灶组。良性肺部疾病组：18例，男8例，女10例，年龄14-86(58.1±17.3)。肺癌组：31例，男17例，女9例。年龄：35-78(60.4±14.53)岁。健康组：11例，其中男5例，女6例，年龄22-74(50±18.8)岁。 实验材料 试剂与实验仪器： 淋巴细胞分离液； 总RNA提取系统(Ⅱ)(total RNA Extraction System Ⅱ购于华美生物工程公司); RT一PCR试剂盒(大连宝生物有限公司); PCR仪(BIOMETRA型); 电泳仪为:DYY一m 33A型; 1 D Kadak成像分析系统; 紫外凝胶扫描仪;离心机。实验方法 1、标本的采集 2、总RNA的提取 3、引物的设计、合成、纯化 4、eDNA合成 5、内参照定量PCR 6、统计学处理 用SPSS 1 0 .0统计软件包进行单因素的方差分析与方差的齐性检验，评价统计学显著性，数据均以均数土标准差表示。结果 恶性组，良性组，健康组的外周血单个核细胞h，rERT表达水平见表1(以均数士标准差表示)。恶性组与良性组比较有显著性差异(P<0.001)，恶性组与健康组比较有显著性差异(P<0.001)良性组与健康人组比较无显著性差异(P>0.05)。 表1:各组外周血PMBCs hTERT表达水平 组别例数(n) PBMCshTERT表达水平 恶性组31 0.9193士0.1239 良性组18 0.5446士0.1459 健康组1 1 0.4517士0.0318 肺癌组hTERTmRNA表达水平为:0.7743一1 .1831;良性炎性病灶组为:0.3375刁.8377;健康组为:0.3746一刁.4925。其中良性炎性病灶组的hTERT量>0.7743者有2例，肺癌组hTERT的量<0.8377者有5例。重叠率为:14.2%。如以0.8377为界值，对肺癌的诊断的敏感度为:83.87%(盯a+C);特异度为:100%(出b+d);阳性预测值为:100%(盯a+b);阴性预测值为:78.26%(d/c+d);准确度为:89.8%(a+d/a+b+e+d)(见表2)。结论 1、肺癌患者外周血单个核细胞检测端粒酶hTERT基因表达水平是一种较为可靠的诊断肺癌的方法。 2、它的定量检测对肺癌的诊断具有较高的特异度和灵敏度。 3、此项基因表达指标可以做为肺癌的一种新的肿瘤标记物。