【摘 要】
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捻转血矛线虫是牛羊等反刍动物体内常见的危害严重的寄生性线虫。为了筛选捻转血矛线虫阿苯达唑耐药性分子标记基因,建立牛羊等反刍动物捻转血矛线虫耐药性的检测方法用于临床指导用药。本研究对捻转血矛线虫阿苯达唑敏感虫株和耐药虫株转录组数据进行了比较分析,筛选了阿苯达唑耐药相关SNP基因并对其进行了结构预测和生物信息学分析;对筛选的阿苯达唑耐药性分子标记基因进行了PCR和RT-PCR扩增和序列分析,开展了捻转
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捻转血矛线虫是牛羊等反刍动物体内常见的危害严重的寄生性线虫。为了筛选捻转血矛线虫阿苯达唑耐药性分子标记基因,建立牛羊等反刍动物捻转血矛线虫耐药性的检测方法用于临床指导用药。本研究对捻转血矛线虫阿苯达唑敏感虫株和耐药虫株转录组数据进行了比较分析,筛选了阿苯达唑耐药相关SNP基因并对其进行了结构预测和生物信息学分析;对筛选的阿苯达唑耐药性分子标记基因进行了PCR和RT-PCR扩增和序列分析,开展了捻转血矛线虫阿苯达唑耐药性检测方法研究。研究结果如下:（1）通过对捻转血矛线虫阿苯达唑敏感虫株和耐药虫株转录组SNP数据分析,共筛选到5个耐药虫株样本相同突变的1154个SNP基因,经GO及KEGG富集后,有770个SNP基因富集到30条GO Term;1154个基因进行KEGG富集后,有20条显著富集通路。（2）与敏感虫株相比较,以5个耐药虫株发生相同突变为选择依据,筛选阿苯达唑耐药分子标记基因并对其进行蛋白结构、理化性质、蛋白二级和三级结构等进行分析。结果HCON-00021530（2865位T-A）、HCON-00109050（360位T-A）、HCON-00024630（1032位C-G）基因的分子式及氨基酸含量、蛋白质二级结构和三级结构均发生了明显改变,可作为耐药性分子标记基因。（3）以20个临床耐药虫株虫卵基因组DNA和总RNA为模板,用PCR和RT-PCR两种方法对筛选的捻转血矛线虫阿苯达唑耐药相关SNP基因HCON-00021530、HCON-00109050、HCON-00024630、HCON-00037800和I型β-tubulin基因进行了扩增和序列分析,建立了虫卵RT-PCR和PCR分子生物学检测方法。
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