论文部分内容阅读
本论文以莱克多巴胺为试材,牛血清白蛋白(BSA)为载体,利用1,4-丁二醇二缩水甘油醚法(Linker法)合成莱克多巴胺免疫原(RAC-BSA),用其免疫日本大耳白兔,获得与RAC结合力较高的抗血清,经Protein A-Sepharose 4B、BSA-Sepharose 4B免疫亲和层析柱二次纯化,制备出纯度较高的抗体。与此同时,论文研究了半抗原与载体蛋白结合的方法,利用三种方法合成并优选出RAC包被原。并在此基础上,分别建立了间接竞争生物素-亲和素放大酶联免疫方法(间接竞争BA-ELISA)和直接竞争生物素-亲和素放大酶联免疫方法(直接竞争BA-ELISA),用于猪肉肌肉组织中RAC残留的快速检测。本研究主要获得以下结果:(1)合成莱克多巴胺免疫原,制备出高抗原结合力的莱克多巴胺抗血清。(2)制备了BSA-Sepharose 4B免疫亲和层析柱,进一步提纯抗血清。(3)分别利用琥珀酸酐法、琥珀酸酐-混合酸酐法及Linker法三种方法合成了RAC包被原。比较了三种包被原的偶联效果并最终优选出琥珀酸酐混合酸酐法偶联得到的包被原进行后续试验。(4)建立了间接BA-ELISA检测方法,用于猪肉肌肉组织中RAC残留的快速检测。所建立方法标准曲线的IC50及IC15分别为0.3±0.02 ng/mL与0.02±0.003 ng/mL,实际样品检出限为0.2μg/kg。板间及板内变异系数低于11%,样品平均加标回收率为77.1%。(5)建立了直接BA-ELISA检测方法,用于猪肉肌肉组织中RAC残留的快速检测。标准曲线的IC50及IC15分别为0.3±0.05 ng/mL与0.03±0.005 ng/mL,样品检出限为0.3μg/kg。板间及板内变异系数低于9%,样品的加标回收率在84%以上。(6)利用高效液相色谱法(HPLC)对建立的莱克多巴胺间接竞争、直接竞争生物素亲和素酶联免疫检测方法的准确性进行了进一步验证。检测结果均与HPLC方法有较高的相关性,线性相关系数R2值分别为0.9822和0.9915。