拟南芥PLT2互作蛋白/基因筛选和WOX5功能研究

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植物干细胞是植物胚后发育形成各种组织器官的细胞来源和信号调控中心。拟南芥根尖干细胞受PLTs和WOX5等转录因子的调控。PLT2蛋白在QC和干细胞中大量积累,过量表达PLT2基因使根分生组织变长;WOX5基因在静止中心细胞特异性表达,在维持周围的干细胞的特性中起重要作用,WOX5过量表达可抑制柱干细胞的分化。为进一步了解植物根尖干细胞调控的分子机理,本研究主要通过酵母双杂交筛选PLT2相互作用蛋白以及对plt1plt2突变体进行EMS诱变,筛选短根恢复突变体,并进一步探究了WOX5基因过量表达对拟南芥生长发育的影响。主要研究结果如下:1、构建pGBKT7-PLT2诱饵表达载体,利用营养缺陷型培养基筛选cDNA文库,共筛选出6个与PLT2相互作用的蛋白,采用酵母双杂交和BIFC技术验证了其中两个蛋白(HSP20和DJA6)与PLT2之间的相互作用,表达分析发现HSP20和DJA6在根尖和茎尖分生组织中表达,暗示HSP20和DJA6有可能参与根尖和茎尖干细胞调控。2、从EMS诱变的plt1plt2突变体库中筛选到了能部分恢复plt1plt2根生长缺陷的突变体,初步表型分析发现它们的根尖分生组织均比plt1plt2双突变体的根尖分生组织长,表明突变基因的正常功能可增强plt1plt2的表型。3、成功构建了WOX5过量表达载体,对转基因株系幼苗分析发现除已报道过的QC和柱干细胞异常分裂表型外,还出现主茎短小甚至不能抽薹,莲座叶正面长出营养芽,花序分生组织表面出现异位花芽,花芽在茎表面随机产生并密集成簇,没有明显的发育先后顺序,植株侧枝减少,果荚短小并向中间皱缩和弯曲,果荚柄上具有丝状结构等未曾报道过的新表型,说明WOX5过量表达对植株的茎、叶以及花等组织器官的发育也有调控作用。本研究为进一步研究PLT2和WOX5在根尖干细胞调控,以及WOX5在其它器官发育中的作用及其机理提供了新的数据与研究材料,对进一步深入研究植物生长发育的调控机制具有重要意义。
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