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第一部分：PCNs携载pENTR-shBMP9的最佳质量比及PCNs对HepG2细胞的毒性研究 目的：探讨PCNs携载pENTR-shBMP9的最佳质量比及PCNs对HepG2细胞的毒性。 方法：通过琼脂糖凝胶电泳检测PCNs携载pENTR-shBMP9的最佳质量比，通过CCK-8实验检测PCNs对HepG2细胞的毒性。 结果：当PCNs/pENTR-shBMP9质量比达到60：1时，吸收率达到100％，琼脂糖凝胶电泳没有观察到多余的质粒。处理48小时后， PCNs在HepG2细胞中具有最高的细胞毒性效应，然后在处理72小时后回到基线。在2μg/μl浓度下，HepG2细胞存活率为97.7％，即使PCNs浓度为4μg/μl，48小时后，HepG2细胞存活率仍>85％（85.0±0.23％），表明PCNs对HepG2细胞毒性较低。 结论：PCNs携载pENTR-shBMP9的最佳质量比为60:1，PCNs对HepG2细胞毒性较低。 第二部分：PCNs/pENTR-shBMP9转染在HepG2细胞中的生物学效率 目的：探讨PCNs/pENTR-shBMP9转染在HepG2细胞中的生物学效率。 方法： PCNs/pENTR-shBMP9以75:1.25,150:2.5和300:5μg/μg的质量浓度梯度转染进HepG2细胞，分别培养12h,24h,48h和72h。通过PCR和WB方法检测PCNs/pENTR-shBMP9转染进入HepG2细胞对BMP-9的最佳抑制浓度和时间,与Lipofectamine2000转染shBMP9对比，通过PCR和WB方法检测PCNs/pENTR-shBMP9转染进入HepG2细胞的生物学效率。 结果：在PCNs/pENTR-shBMP9质量比为150μg：2.5μg时，转染48小时后，BMP-9 mRNA和蛋白呈现显著的抑制作用（p﹤0.01）。使用lipofectamine2000/shBMP9转染作为对照，PCNs/pENTR-shBMP9诱导的 BMP-9在 mRNA和蛋白水平的抑制作用比Lipofectamine2000/shBMP9在 HepG2细胞中更明显（p﹤0.01），表明PCNs/pENTR-shBMP9的转染效率在 HepG2细胞体外实验中高于lipofectamine2000/shBMP9。 结论：在PCNs/pENTR-shBMP9质量比为150μg：2.5μg时，转染48小时后， BMP-9 mRNA和蛋白呈现显著的抑制作用。PCNs/pENTR-shBMP9转染效率在体外高于lipofectamine2000/shBMP9。 第三部分：PCNs/pENTR-shBMP9转染在胰岛素抵抗动物模型中的生物学效率 目的：探讨 PCNs/pENTR-shBMP9转染在胰岛素抵抗动物模型中的生物学效率。 方法：将C57BL/6J小鼠随机分成4组，每组5只小鼠。禁食10-12小时后，在接受 HFD的第11周时通过尾静脉给予 PCN， PCNs/pENTR-shBMP9或pENTR-shBMP9。通过PCR和WB方法测定PCNs/pENTR-shBMP9注射进入小鼠体内的最佳抑制浓度和时间。与pENTR-shBMP9对比，通过PCR和WB方法检测PCNs/pENTR-shBMP9注射进入小鼠体内的生物学效率。 结果：当PCNs/pENTR-shBMP9质量比为150：2.5μg/μg时，肝脏中mRNA和蛋白质中BMP-9的表达水平低于其他质量比（p﹤0.01）。另外，在第5天发现对肝BMP-9表达呈现最显著抑制作用（p﹤0.01）。当pENTR-shBMP9转染作为对照时，PCNs/pENTR-shBMP9处理导致肝脏mRNA和蛋白质水平中BMP-9表达的显著降低（p﹤0.01）。 结论： PCNs/pENTR-shBMP9质量比为150：2.5μg/μg时，PCNs/pENTR-shBMP9注射入小鼠尾静脉第5天时BMP-9 mRNA和蛋白表达的抑制率最高，且 PCNs/ pENTR-shBMP9的转染效率在体内高于pENTR-shBMP9。 第四部分：PCNs/pENTR-shBMP9转染对体内胰岛素信号传导途径的影响 目的：探讨 PCNs/pENTR-shBMP9转染对体内胰岛素信号传导途径的影响。 方法：将 C57BL/6J小鼠随机分成4组，每组5只小鼠。禁食10-12小时后，在接受 HFD的第11周时通过尾静脉给予 PCN， PCNs/pENTR-shBMP9或pENTR-shBMP9。通过WB方法检测PEPCK， p-IR，p-AKT，IR，AKT的表达。 结果：PCNs/pENTR-shBMP9转染的小鼠中的PEPCK蛋白水平显著高于pENTR-shBMP9处理的小鼠（p﹤0.01）。PCNs/pENTR-shBMP9小鼠中的InsR和Akt的磷酸化水平与pENTR-shBMP9小鼠相比显著降低（p﹤0.01）。 结论： PCNs/pENTR-shBMP9对体内胰岛素信号传导途径的效应比pENTR-shBMP9更强。