补肾法、疏肝法对子宫内膜容受性障碍模型小鼠子宫LPAR-3及Galectin-3影响的比较研究

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目的:以补肾助孕方作为补肾法的代表方,逍遥丸作为疏肝法的代表方。在前期临床研究证实补肾法、疏肝法具有改善子宫内膜容受性作用的基础上,比较补肾助孕方与逍遥丸对LPAR-3及Galectin-3影响的异同,探讨补肾法、疏肝法恢复子宫内膜容受性功能的作用机制和作用环节,以丰富中医“肾主生殖”、“女子以肝为先天”理论的实质内涵,促进中医妇科学的发展。方法:选用健康未孕昆明系雌性小鼠140只,体重25-30g,同品系健康雄性小鼠30只,体重25-30g。参照潘永苗、章汉旺等方法[14-16],适应性喂养两天后,每日对小鼠进行阴道脱落细胞涂片,连续两周,选择动情周期正常的102只小鼠随机分为六组,即模型组、对照组和治疗组,治疗组包括补肾助孕方高剂量组、逍遥丸方高剂量组(5.4g/ml/100g体重,相当于临床剂量的24倍)和补肾助孕方低剂量组、逍遥丸方低剂量组(2.7g/ml/100g体重,相当于临床剂量的12倍)。治疗组和模型组在动情后期给予小鼠腹腔内注射丙氨瑞林40IU/100g体重,连续9天,至第9天同时注射人绝经期促性腺激素( HMG) 1IU/100g , 48h后注射人绒毛膜促性腺激素(HCG) 10IU/100g体重。治疗组在注射丙安瑞林的第一天起分别灌服补肾助孕方和逍遥丸方,连续11天。模型组和对照组连续11天灌服同剂量的蒸馏水,每日一次。模型组和治疗组在注射完HCG日当晚,对照组在阴道涂片显示排卵日当晚按雌雄鼠2:1比例合笼,第二天检查小鼠阴栓,采用受孕小鼠,在妊娠第四天午夜23-24点,采用断头法处死小鼠后,立即无菌操作,在冰盘上取下小鼠左侧子宫,放入EP管内,投入液氮,然后迅速转入-80℃冰箱保存,用于RT-PCR检测LPAR-3mRNA及Galectin-3 mRNA;右侧子宫用4%多聚甲醛固定,行免疫组织化学染色。结果:1补肾助孕方、逍遥丸方对子宫内膜容受性障碍小鼠子宫LPAR-3蛋白和LPAR-3mRNA表达的影响与对照组比较,模型组小鼠子宫LPAR-3蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,补肾助孕方低剂量组、逍遥丸低剂量组小鼠子宫LPAR-3蛋白表达升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠子宫LPAR-3mRNA降低(P<0.05)。与模型组比较,补肾助孕方高剂量组、逍遥丸方高、低剂量组小鼠子宫LPAR-3mRNA升高(P<0.05),其中逍遥丸高剂量组其LPAR-3mRNA表达接近对照组(P>0.05)。2补肾助孕方、逍遥丸方对子宫内膜容受性障碍小鼠子宫Galectin-3蛋白表达和Galectin-3mRNA表达的影响。与对照组比较,模型组小鼠子宫Galectin-3蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,补肾助孕方高剂量组小鼠子宫Galectin-3蛋白表达明显升高(P<0.01),并接近对照组(P>0.05),补肾助孕方低剂量组小鼠子宫Galectin-3蛋白表达升高(P <0.01),补肾助孕方高、低剂量组其表达无差别。与模型组比较,逍遥丸高、低剂量组小鼠子宫Galectin-3蛋白表达明显升高(P<0.01),逍遥丸低剂量组小鼠子宫其表达接近对照组(P>0.05),逍遥丸高、低剂量组之间其表达无差别。与对照组比较,模型组小鼠子宫Galectin-3mRNA明显降低(P<0.01),与模型组比较,补肾助孕方高剂量组小鼠子宫Galectin-3mRNA明显升高(P <0.01),逍遥丸高剂量组小鼠子宫Galectin-3mRNA表达升高(P <0.05)。3补肾助孕方、逍遥丸对子宫内膜容受性障碍小鼠子宫LPAR-3和Galectin-3影响的比较与补肾助孕方低剂量组比较,逍遥丸低剂量组子宫LPAR-3蛋白表达明显升高(P<0.01),补肾助孕方高剂量组与补肾助孕方低剂量组之间其蛋白表达无明显差异(P>0.05)。补肾助孕方高剂量组与逍遥丸方高剂量组,补肾助孕方低剂量组与逍遥丸方低剂量组之间子宫LPAR-3mRNA和Galectin-3mRNA表达无明显差异(P>0.05)。结论:1补肾助孕方、逍遥丸均能改善子宫内膜容受性障碍模型小鼠子宫LPA- R-3蛋白、Galectin-3蛋白和LPAR-3mRNA、Galectin-3mRNA的表达,推测两方均能通过此途径提高子宫内膜容受性。2逍遥丸低剂量组Galectin-3蛋白表达高于补肾助孕方低剂量组;其余各组之间LPAR-3蛋白、Galectin-3蛋白和LPAR-3mRNA、Galectin-3mRNA的表达无明显差异。提示低剂量的逍遥丸在改善子宫内膜容受性方面略优于补肾助孕方,可能与疏肝法调理气血的功能有关。
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