研究背景和目的：肠缺血再灌注（intestinal ischemia-reperfusion，IIR）是发生多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS）的重要病理生理过程。全身炎症反应（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）是IIR后MODS发生的重要发病机理，早期干预炎症反应，积极防治MODS，是降低危重病患者病死率的重要手段。全身系统性炎症反应的发生取决于机体的免疫系统。传统上免疫系统分为天然免疫和获得性免疫。我们课题组前期工作表明猕猴IIR后并发SIRS及MODS的发病过程中，肠粘膜TLRs-NF-κB-炎症介质信号转导通路全面激活，但IgA、SC、SIgA均显著减少，表现为肠粘膜过强天然免疫与降低的获得性体液免疫共同存在。IFN-γ是免疫炎症反应的一种重要调控因子，对天然免疫和获得性免疫均有调控作用，但IFN-γ是否参与IIR后肠粘膜免疫反应及SIRS的形成?如果参与，是通过何种机制?细胞因子常与其它激素，神经肽、神经递质共同组成细胞间信号分子系统，如果IFN-γ参与了肠黏膜免疫活动，生长抑素（somatostatin，SST）是否影响IFN-γ的产生?通过这方面的研究，以期增进我们对IIR后肠黏膜免疫的认识，并为防治SIRS、MODS提供新的思路。急性重症胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是导致IIR的常见病因，在SAP—IIR—MODS的发生中，IIR反过来对胰腺组织病理及功能又有何影响?自SST用于治疗SAP以来，有效降低了MODS发病率。SST的这些作用究竟仅仅是因为抑制了胰酶分泌，还是可以避免IIR后SIRS对胰腺的再次打击?这方面的研究将更新临床防治MODS或SAP的思路，并增加我们对SST在抗炎药理方面的认识。传统认为，B细胞介导的获得性免疫在肠粘膜免疫中具有重要的作用。我们研究小组前期的实验表明IIR后，大鼠肠淋巴细胞归巢增加，猕猴PP（peyer’s patches，PP）内B细胞明显增多，但是肠粘膜获得性体液免疫效应却表现为sIgA减少。新近研究表明，B淋巴细胞具有获得性免疫及天然免疫的双重功能。那么IIR时PP内大量集聚的B细胞是否参与肠黏膜增强天然免疫的形成?如果有，是哪一类或哪一发育阶段的B细胞?参与天然免疫的B细胞是否包括具有免疫记忆的B淋巴母细胞?这些研究能增进我们对临床防治SIRS及MODS分子靶点的新认识。方法：1．实验动物：全部实验所用健康成年猕猴来自成都野生动物世界，雌雄不限，体重6.9±1.7Kg。猕猴进出成都野生动物世界猕猴喂养区时均检疫合格。2．实验分组：15只健康成年猕猴随机分为正常、IIR、IIR+SST三组，每组5只动物。肠缺血再灌注手术：肌注复方二甲苯胺噻嗪（0.06～0.24ml／kg）麻醉动物，实验过程中用安定静注0.16±0.09mg／kg／h维持昏睡状态。无菌铺巾，沿腹正中切开，分离肠系膜上动脉后予以夹闭，60 min后松夹进行再灌注，恢复肠系膜上动脉血流。再灌注后1h，静脉输入0.9％盐水，0.1～0.2ml／kg／min，24h内补入葡萄糖20g。3．预防使用SST：在夹闭肠系膜上动脉前，从静脉滴注生长抑素，5μg／kg／h，持续至再灌注后24h。4．HE染色法观察回肠、胰腺组织病理损伤程度。5．放射免疫分析检测外周血SST的含量。6．ELISA检测肠上皮细胞、肠淋巴细胞、肠淋巴细胞孵育上清液、回肠组织匀浆、外周血清、门静脉血清中IFN-γ的水平。7．ELISA检测外周血清及回肠组织匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-α水平。8．酶比色法检测血清淀粉酶及脂肪酶。9．免疫组化检测IFN-γ、CD4、CD8、CD57、CD20、CD5、PAX-5、浆细胞、TLR4、TLR2、NF-κB、integrinα4β7的分布，图像分析软件测定阳性面积及IOD值。10．门静脉血培养。11．培养人B淋巴母细胞株hmy2.cir，细胞干预组加入LPS（10μg／ml），另一组为无干预的空白对照组，37℃，5％CO₂孵育。12．ELISA检测干预24小时后培养上清液中IL—6及干预72小时后培养上清液中IgM的水平。13．免疫荧光检测hmy2.cir细胞TLR2、TLR4表达。14．MTT检测LPS干预hmy2.cir细胞株后24小时、48小时、72小时的增殖情况结果：1．IIR后回肠粘膜上皮细胞、门静脉血内IFN-γ水平较正常组显著增加（分别为30.7±20.1 pg／mg vs 9.4±2.4pg／mg总蛋白；18.1±1.1pg／ml vs 8.7±1.3 pg／m1），p＜0.05，而肠淋巴细胞及其上清液的IFN-γ水平较正常组明显降低（分别为1.7±0.02pg／mg vs 11.1±4.0pg／mg总蛋白；2.2±0.3pg／mg ys 5.2±1.5pg／mg）（p＜0.05）；2．预防性给予SST后，与IIR组比较，回肠上皮细胞及门静脉血内IFN-γ的水平显著下降（分别为13.6±4.9pg／mg总蛋白，p=0.055；8.9±2.5pg／ml，p＜0.05），肠淋巴细胞及其上清液的IFN-γ水平无明显变化；3．组织匀浆及外周血的IFN-γ水平在三组间无明显差别。CD4⁺细胞、CD57⁺细胞分布与IFN-γ无关，CD8⁺细胞分布与IFN-γ变化趋势相反。4．IIR后小肠黏膜PP数量增加、增大。5．正常组猕猴肠黏膜PP内的B细胞均为PAX-5⁺ CD20⁺ CD5^-，系B-2细胞，黏膜固有层有散在浆细胞。IIR后PP内PAX-5⁺细胞显著增加（p＜0.05），但其中CD20表达未见增多，CD5^-表达，出现PAX-5⁺ CD20^- CD5^-的祖B细胞，黏膜固有层内浆细胞显著减少（p＜0.05）。6．正常时，PP中TLR2、TLR4、NF-κB及IFN-γ表达均较弱，IIR时PP内四种分子表达均明显增强。7．正常PP内有散在α4β7表达，IIR组明显减少。8．IIR后，猕猴外周血及回肠黏膜组织中炎症介质IL-1β（外周血：79.2±14.4ng／ml；回肠：294.0±46.4pg／g）、IL-6（外周血：1261±297.5ng／ml；回肠：1527±160.8p／g）、TNF-α（外周血：64.8±18.7ng／ml；回肠：213.2±29.2pg／g），与正常组IL-1β（外周血：27.3±7.17ng／ml；回肠：82.8±20.5pg／g）、IL-6（外周血：13.9±10.50ng／ml；回肠：709.6±211.2pg／g）、TNF-α（外周血：3.04±1.01ng／ml；回肠：56.0±10.04pg／g）比较，均显著增加（p＜0.05）。SST治疗后，外周血中IL-1β（40.0±9.9ng／ml）、IL-6（244.4±70.0 ng／ml）、TNF-α（19.2±10.1 ng／ml）水平明显下降，与IIR组相比有显著性差异（p＜0.05）。9．正常组5只动物的门静脉血培养均为阴性；IIR组所有猕猴血培养均有细菌生长，阳性率为100％，而且引起菌血症的细菌均为大肠杆菌。10．LPS干预72小时后，hmy2.cir细胞上清液中IgM水平为0.528±0.002 ng／ug总蛋白，与空白对照组（0.617±0.057ng／ug总蛋白）相比显著减少（p＜0.05）。11．LPS干预72小时后，与对照组相比，hmy2.cir细胞TLR4的IOD（1201.3±913.4 vs 5078.2±2483.2）及TLR2的IOD（174.8±80.2 vs 1463.5±51.2）较对照组显著减少（p＜0.05）。12．LPS干预24小时后，hmy2.cir细胞上清液中IL-6水平（0.528±0.002 pg／ug总蛋白）与空白对照组（0.406±0.218pg／ug总蛋白）相比显著减少（p＜0.05）。13．LPS干预24小时后，hmy2.cir细胞增殖水平（0.389±0.061）较空白对照组（0.727±0.245）为低，72小时后细胞增殖水平（0.562±0.219）较对照（0.173±0.079）显著增加（p＜0.05）。14．IIR后，所测胰淀粉酶（2 492.0±2 102.8 IU／L vs 385.4±136.1 IU／L）及脂肪酶（1 278.0±1 446.3 IU／L VS 25.8±13.0 IU／L）在血中水平较正常组均显著升高（p＜0.05）。预防性使用SST，既使发生IIR，血胰淀粉酶（567.0±338.0 IU／L）及血脂肪酶（77.2±779 IU／L）明显回落。15．放射免疫分析结果表明，IIR后外周血SST（62.17±13.56 pg／ml）较正常对照（160.61±33.84 pg／ml）明显下降（p＜0.05），静脉补充SST后，循环SST水平（156.32±30.25 pg／ml）显著回升（p＜0.05）。16．IIR时可见胰腺组织病理损伤。预防性使用SST后，胰腺病理组织学较IIR时明显减轻，组织学评分从+++降到++。结论：1．IIR后，来源于上皮细胞及早期祖B细胞大量产生IFN-γ，后果是通过肠、黏膜、肺泡肥大细胞上的FcεRIα活化肥大细胞，引起强烈的天然免疫反应。换言之，IFN-γ将TLR-NF-κB与肥大细胞两个天然免疫反应通路联系在一起，构成了复杂、高效的天然免疫网络。2．IIR后祖B细胞参与肠黏膜天然免疫反应，在肠黏膜屏障严重损伤时常伴发LPS血症，这使得LPS可在循环甚至骨髓中通过祖B细胞的TLR介导使祖B细胞迅速卷入天然免疫，在循环中产生大量IL-1β、IL-6、TNF-α，这应是SIRS发生的重要原因之一。3．IIR后肠黏膜PP内PAX-5⁺ CD20⁺ CD5^-、具有免疫记忆的B淋巴母细胞并未在强烈、快速反应的天然免疫中发挥明显作用。4．整个B淋巴细胞群具有天然免疫及获得性免疫的双重功能。在不同发育阶段的B淋巴细胞仅分别发挥其中某一项功能。代表早期发育阶段的祖B淋巴细胞高表达TLRs，且能被LPS激活，经TLR-NF-κB-促炎因子途径发挥快速、强烈的天然免疫功能；成熟B细胞具有较弱的天然免疫作用，主要参与获得性免疫；代表发育晚期阶段的B淋巴母细胞虽有TLRs表达，但不能被LPS激活，不具有天然免疫功能。5．IIR导致MODS时，胰腺应为值得重视的、早期受损的器官。其炎症组织病理改变，不是缺血后氧化应激所致，而与循环中炎症介质进入胰腺后激活NF-κB有关。SST可通过降低全身炎症反应，解除血炎症介质对胰腺的再次损伤，从而避免急性胰腺炎向重症方向发展。