蛋白水解酶ADAMs磷酸酶HSP70 PCNA在大鼠肝生长发育中作用的研究

来源 :河南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:LUXU_ZHANG
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运用SDS-PAGE、SDS-G-PAGE、Western-blot、IEF-G-PAGE、离子交换层析、RT-PCR等方法研究了大鼠肝从后期胚胎到成体生长发育过程中酸性、中性和碱性蛋白水解酶、ADAMs、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、HSP70、PCNA的变化。结果表明:(1)30和32kD酸性蛋白水解酶在开始吃奶和出生后第五周各出现一个活性高峰;75/80kD酸性蛋白水解酶仅在出生后第三周有活性。71和75kD中性蛋白水解酶在出生后第三周活性最强;15kD碱性蛋白水解酶在开始吃奶时有活性;(2)75kD的ADAM在出生前至出生后第20天和出生后第四周到成体的含量呈正态分布;40kD的ADAM主要在胚胎肝和吃奶时检测到,而30kDADAM在吃饲料以后各个时期检测到;47/50,73和140kDMDC15变化和75kD的ADAM相似,30kD的MDC15仅出现在出生后15~35天的肝脏内,58kD的MDC15主要存在出生后7~45天的幼鼠肝中;(3)140kDACP、AKP仅存在出生后三、四周的幼鼠肝内,160kDACP、AKP和170kDAKP在营养方式诱导的变化趋势是相同的,180kDACP和AKP在肝生长发育中是逐渐减弱的;(4)HSC70在吃奶一周内是减弱的,以后各时期逐渐增强,到成体时达到最高峰;(5)在肝生长发育过程中,PCNA呈逐渐减弱的趋势,但在出生后的第五周,其表达量维持在稳定水平上;(6)初步分离纯化的30和32kD酸性蛋白水解酶等电点为5.8,pH3.5时活性最强,HMB、Fe3+、Cu2+能制剂其活性;(7)MDC15引物检测各生长时期的肝,cDNA均呈阳性,测序结果表明,它和大鼠肌肉中的MDC15有98%同源性;(8)HSP70引物检测各生长时期肝,cDNA均呈阳性,测序结果表明,它和大鼠的HSP70有100%同源性。以上结果反映了个体营养来源和方式能有效影响肝的生理、生化过程,初步揭示营养、肝功能、生长发育的密切关系。
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