小鼠肾癌Delta样分子4疫苗的初步研究

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目的:初步研究制备DLL4疫苗并验证在裸鼠肾癌模型上的作用机制。制备表达DLL4的质粒,并观察在DLL4免疫后的裸鼠上种植肿瘤后的生长情况、生长大小及局部变化等,为肾癌生物免疫疗法及临床辅助肾癌治疗提供一定的实验依据。方法:1.DLL4免疫载体的制备:DLL4cDNA是由特异性引物PCR扩增得到DLL4开放阅读表达框,限制性内切酶双酶切后插入同样酶切的pVAX1质粒并经酶切和测序验证,纯化后转染细胞进行Western免疫印记验证。2.裸鼠免疫:4周龄的雄性裸鼠随机分为2组,皮下注射超纯化的pVAX1-DLL4载体悬液;另一组为其阴性对照,注射空白pVAX1载体悬液,分3周次免疫裸鼠,40ug/次。3.裸鼠肾癌模型的建立及免疫效果评价:以皮下注射形式接种肾癌细胞于2组裸鼠腋下及腹股沟旁(用量为:0.2ml/只),拟观察肿瘤的生长情况及其4周及8周后肿瘤直径,做随机对照分组实验结果分析其免疫效果。结果:1. DLL4cDNA表达框序列为2058bp,转入pVAX1质粒载体后经酶切和测序验证构建成功;2.对照组部分裸鼠在种植肿瘤细胞系后3周生出肿瘤,肿瘤较实验组大,约(1.26±0.91)cm,由此得出可以使用裸鼠建立肾癌动物模型;3.实验组DLL4肿瘤疫苗免疫的小鼠肿瘤生长较小,大小为(1.07±0.70)cm,肿瘤外观略发红。结论:1.可以通过PVAXl连接DLL4制备成含有DLL4的质粒作为肿瘤疫苗。2.使用裸鼠可以成功建立动物肾细胞癌模型。
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