由玉蜀黍凸脐蠕孢真菌引起的玉米大斑病是当今玉米生产上的重要病害之一,经常会造成严重的经济损失。目前的试验研究表明,许多植物病原真菌的生长、发育、蛋白的输出和分泌都受到细胞外信号转导途径的调控,如Ras、MAPK、cAMP及Ca²⁺途径等,这些信号转导途径对植物病原真菌生长发育以及致病性均有重要的调节作用。其中,Ras蛋白位于MAPK信号转导通路的上游,ras基因在进化中高度保守,广泛存在于各种真核生物中,如:哺乳动物类、真菌、线虫及酵母中。遗传学、生物化学以及分子生物学等方面的试验研究表明,Ras在细胞外刺激所产生的信号转导通路中处于中枢地位。因此,深入研究Ras蛋白的功能有利于研究病菌的发育和侵入机制等,同时对研究病菌与寄主植物之间的互作以及有关植物病害防治、方法具有重要的理论意义。本试验对玉米大斑病菌的Ras蛋白进行了初步研究,主要结果如下:1.根据已知的植物病原真菌ras基因的保守序列设计引物,采用PCR扩增技术获得玉米大斑病菌ras基因的同源片段,利用Genome walking技术获得了ras基因的DNA全长序列。利用BLASTX软件对该基因的全长序列进行分析,结果表明该序列与Pyrenophora tritici、Phaeosphaeria nodorum SN15、Magnaporthe grisea的ras基因同源性为80%⁹0%。2.利用ras基因特异性抑制剂—手霉素A处理玉米大斑病菌,对Ras蛋白的功能进行了初步分析。结果表明,经手霉素A处理后,病菌可以形成与野生型同样正常的菌丝和分生孢子,但分生孢子萌发的时间发生延迟、且芽管短小、粗大;分生孢子萌发率和附着胞产生数量明显下降。用20¹20μmol/L浓度的手霉素A处理6³6 h后,在此处理区间范围内,手霉素A对分生孢子萌发和附着胞产生的抑制程度随着浓度增加而上升,但随着处理时间的延长而下降。3.进一步利用DNAMAN软件分析了ras基因片段的酶切位点,并且基于pSO-Ⅰ质粒构建了玉米大斑病菌ras基因的反义诱导表达载体,为下一步原生质体转化研究功能做好准备。