目的:探讨改进肉芽肿性小叶性乳腺炎病灶中细菌检测的方法,评估比较肉芽肿性小叶性乳腺炎中的肉芽肿和病灶旁组织中的菌群分布差异,进一步研究肉芽肿性小叶性乳腺炎与细菌感染的关系。方法:收集2018年6月~2020年4月于湖南省人民医院初治新发的46例经病理确诊的肉芽肿性小叶性乳腺炎患者的病例资料,选择术前2周内未进行抗感染治疗的14例患者作为研究对象,于手术室无菌条件下收取每例患者的肉芽肿病灶、病灶旁组织(介于正常组织和病灶之间的组织,且距离病灶至少1~2cm)以及脓液样本各1份,共取得36份样本(其中脓液样本9份,肉芽肿样本14份,病灶旁组织样本13份),将收集到的9份脓液样本及时接种于培养基中,进行微生物培养与鉴定。另将收集到的14份肉芽肿组织样本设置为RY组,13份病灶旁组织样本设置为ZF组,提取两组样本的DNA,应用高通量测序技术,对RY及ZF组菌群进行16S rDNA测序,并利用QIIME等软件将测序结果与16S数据库比对进行物种注释,根据物种丰度信息进行物种分类与丰度分析、Alpha多样性分析及Beta多样性分析,进一步对肉芽肿性小叶性乳腺炎患者的病灶和病灶周围组织中的菌群种类、构成、分布及特点进行相关性分析。结果:1.9份脓液样本经培养后仅1例阳性,且未见厌氧菌生长,阳性率为11.1%(1/9),经分离纯化后鉴定为黄单胞菌。2.肉芽肿及病灶旁组织共27份样本的细菌群落,经过测序并筛除、过滤低质量碱基的数据后,去除不合格序列,共计得到1935,765条有效序列,片段平均长度为409bp,与16S rRNA基因V3-V4区的序列长度切合,通过与数据库Silva132比对,进行物种注释,并对不同分类层级统计发现:共有1937个OTUs,其中,能够注释到数据库的OTUs数目为1899个(98.04%),所有样本均可注释到库,其注释到界水平的比例为98.04%,门水平的比例为78.06%,纲水平的比例为75.22%,目水平的比例为69.95%,科水平的比例为64.02%,属水平的比例为44.91%,种水平的比例为15.07%。3.在门水平上,我们发现占据主导地位的主要包括Proteobacteria(变形菌门)、Firmicutes(厚壁菌门)、Bacteroidetes(拟杆菌门);在属水平上的优势物种为Stenotrophomonas(寡养单胞菌属)、Photobacterium(发光杆菌属)、Brevundimonas(短波单胞菌属)。在2例患者的3份样本中检测到了相对丰度较低(<0.001)的Corynebacterium(棒状杆菌属),其中来自同一例患者的2份样本最终被鉴定为柯氏棒状杆菌(Corynebacterium kroppenstedtii)。4.稀释曲线及物种累积箱型图表明抽样结果充分,可以进行数据分析,根据物种注释情况,进一步分析两组样本菌群的复杂度,计算出两组样本的Chao1、ACE、Shannon、Simpson、Good’s coverage等α多样性指数,结果显示两组样本测得的物种总数及菌群多样性均不具有明显的差异(P>0.05)。5.我们还进行了β多样性分析,利用Pco A分析样本的菌群结构,结果显示两组样本相对聚集成簇,经相似性分析(Anosim分析)统计量R值=-0.04006<0,说明组内差异大于组间差异(P=0.765>0.05),各样本中菌群结构未见明显差异。结论:1.初步确定细菌感染与肉芽肿性小叶性乳腺炎的发生有关,以混合感染为主,可能的病原体包括寡养单胞菌属、发光杆菌属、短波单胞菌属等。2.肉芽肿性小叶性乳腺炎患者的坏死肉芽组织及病灶旁组织中的菌群分布大致相同。3.在肉芽肿性小叶性乳腺炎的病原学检测方法中,基于16S rDNA的高通量测序技术虽然具有通量高、灵敏度高、特异性强的优势,但其临床应用价值尚待进一步探索。