Apoptin是由鸡贫血病毒CAV(Chicken Anemia Virus)编码的小分子病毒蛋白,又称VP3。研究发现,Apoptin能够诱导不同组织来源的人肿瘤细胞凋亡;而在人正常二倍体细胞中,Apoptin处于未活化状态,也不诱导细胞凋亡。[1]Apoptin特异性诱导人肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞无杀伤作用,有望成为一种理想的抑瘤制剂。[2,3]蛋白质一级结构的改变可使其高级结构发生相应的变化,而蛋白质的空间构象是蛋白质特有功能和活性的结构基础。实验室前期实验中已经证实:在体外实验中,PTD4-VP3融合蛋白具备诱导HepG2细胞凋亡的效应,而对人正常肝细胞L-02无致凋亡作用本实验旨在探讨去除VP3重组体基因中无意义序列后,VP3融合蛋白质可溶性表达以及蛋白质活性效应的变化。本实验利用基因工程重组技术,将VP3融合蛋白中几段无意义序列逐一去除,从而比较重组体所表达融合蛋白与原PTD4-VP3融合蛋白可溶性表达情况,以及其特异性诱导肿瘤细胞凋亡得效应。探讨蛋白质结构的变化对蛋白质生物活性功能的影响。推动后续的VP3体内外肿瘤治疗实验。实验结果显示重组后PTD4-VP3融合蛋白的可溶性表达相对重组前VP3融合蛋白有明显差异。经比较重组前后融合蛋白在不同浓度下孵育肿瘤细胞HepG2诱导肿瘤细胞凋亡的效应。观察到不同PTD4-VP3融合蛋白诱导肿瘤细胞凋亡率有明显差异。这一发现推动了实验室PTD4-VP3融合蛋白的纯化与大量制备。为VP3融合蛋白进一步应用于特异性诱导肿瘤细胞凋亡的体内外实验提供了支持。同时,证实了PTD4-VP3融合蛋白一级结构发生改变,可引起其相关的生物学活性变化以及蛋白质可溶性表达的改变。