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第一部分:青藤碱对戊四氮致痫大鼠的抗癫痫及神经保护作用癫痫是一种常见的中枢神经系统疾病,以反复性、急性发作为特征,常导致认知功能损伤、精神障碍甚至死亡,严重危害人类健康和生活质量,而现有的抗癫痫药对相当一部分患者无效或不敏感,因此,迫切需要寻找新的抗癫痫药物。青藤碱是从中药青风藤中提取的生物碱单体,具有镇静、镇痛、抗炎、神经保护等作用,但其对癫痫的影响还未见报道。目的:观察青藤碱对戊四氮致痫大鼠行为学、海马神经元损伤和认知功能的影响。方法:通过戊四氮建立慢性点燃癫痫大鼠模型,观察青藤碱对戊四氮致痫大鼠行为学的影响;采用HE染色观察大鼠海马神经元形态学方面的变化;使用Hoechst33258染色和Western blot方法检测海马神经元凋亡情况;采用Morris水迷宫方法检测大鼠学习记忆的能力。结果:1.行为学结果:连续给予亚惊厥剂量戊四氮腹腔注射后,大鼠发作等级逐渐升高,死亡率增加,癫痫发作的潜伏期缩短,持续时间延长;而给予不同剂量SN(20mg/kg,40mg/kg,80mg/kg)干预后可明显降低癫痫发作级别,降低死亡率,延长癫痫发作潜伏期和缩短癫痫持续时间。2.HE染色结果:和正常对照组大鼠相比,戊四氮致痫大鼠海马CA1及CA3区神经元可见排列紊乱、嗜酸性变、核浓缩、核深染等异常改变,而给予不同剂量SN(20mg/kg,40mg/kg,80mg/kg)干预后明显减轻神经元的损伤。3.Hoechst33258染色结果:和正常对照组大鼠相比,戊四氮致痫大鼠海马CA1及CA3区神经元胞核呈致密浓染或呈碎块状,出现明显的凋亡,而给予不同剂量SN(20mg/kg,40mg/kg,80mg/kg)干预后明显减轻神经元的凋亡。4.Western blot结果:和正常对照组大鼠比较,戊四氮致痫大鼠海马神经元Bax和活化的caspase-3表达显著增加,Bcl-2表达显著减少,而给予不同剂量SN(20mg/kg,40mg/kg,80mg/kg)干预后明显减少Bax和活化的caspase-3的表达,增加的Bcl-2表达。5.Morris水迷宫实验结果:和正常对照组大鼠相比,戊四氮致痫大鼠学习记忆能力明显下降,而给予不同剂量SN(20mg/kg,40mg/kg,80mg/kg)干预后显著改善癫痫大鼠的学习记忆能力。结论:青藤碱能抑制戊四氮致痫大鼠癫痫发作,减轻神经元损伤,改善其学习记忆能力,具有神经保护作用。第二部分:青藤碱抗癫痫及神经保护作用的机制研究NLRP1炎症小体是由NOD样受体NLRP1、接头蛋白ASC和caspase-1组成的多蛋白复合物,它被激活后可剪切pro-IL-1β和pro-IL-18至成熟的IL-1β和IL-18,参与炎症反应,钾离子、酸中毒、氧化应激等都可调节NLRP1炎症小体激活,但是传统抗炎抗风湿药物青藤碱对NLRP1炎症小体的影响还未见报道。目的:观察青藤碱对戊四氮致痫大鼠海马神经元NLRP1炎症小体激活及其相关炎症因子表达的影响,探讨其抗癫痫和神经保护作用的可能机制,以期为青藤碱成为新的潜在抗癫痫药提供理论依据。方法:建立戊四氮慢性点燃癫痫大鼠模型,采用Western blot检测致痫大鼠海马神经元中NLRP1、Caspase-1和ASC蛋白的表达情况,Real time-QPCR检测NLRP1、Caspase-1和ASC m RNA的表达水平,探讨青藤碱对致痫大鼠海马神经元炎症小体复合物表达情况的影响;采用Western blot检测大鼠海马神经元中IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α蛋白的表达水平,ELISA检测大鼠海马神经元IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α的含量变化,探讨青藤碱对炎症因子相关蛋白的影响。结果:1.Western blot结果:与对照组比较,PTZ组NLRP1、Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α等表达明显增加,而不同剂量SN(20mg/kg,40mg/kg,80mg/kg)干预使上述蛋白表达明显下降。2.Real time-QPCR结果:与对照组比较,PTZ组的NLRP1、Caspase-1和ASC m RNA表达水平明显上升,而不同剂量SN(20mg/kg,40mg/kg,80mg/kg)干预使NLRP1、Caspase-1和ASC m RNA表达水平明显下降,且呈浓度相关性。3.ELISA结果:与对照组比较,PTZ组的IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α的含量显著增加,而不同剂量SN(20mg/kg,40mg/kg,80mg/kg)干预使IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α的含量呈浓度依赖性递减结论:青藤碱抗癫痫及神经保护可能是通过抑制NLRP1炎症小体激活及相关炎症因子表达来实现的。