梅山猪ghrelin和motilin基因的克隆、特性及功能研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cdna3
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胃动素(motilin)和生长激素释放肽(ghrelin)是两种重要的脑肠肽,是调节和维持胃肠消化功能的重要细胞因子,它们通过中枢神经系统和外周神经系统调节胃肠的蠕动,胃酸的分泌和胃肠的排空。 本文通过RT-PCR方法克隆了梅山猪motilin和ghrelin基因全编码序列及部分基因组序列,采用生物信息学和分子生物学技术分析它们的核苷酸和氨基酸序列,以半定量RT-PCR分析了motilin和ghrelin基因的组织表达谱,用猪辐射杂种细胞系技术(RH)对两个基因进行染色体定位,构建的真核表达载体实现了体外表达,并通过不同激素处理和交叉处理IBRS2细胞,分析了Ghrelin基因的转录表达调控。结果表明:(1)梅山猪ghrelin和motilin基因的编码区cDNA具有单核苷酸多肽性。(2)ghrelin和motilin基因的组织表达谱呈广泛分布,其中ghrelin基因在胃组织中表达量最高,在肝最低,而motilin mRNA在小肠中丰度最高,在盲肠中最低。(3)用特异引物扩增得到ghrelin和motilin的部分基因组序列。(4)猪ghrelin和motilin分别定位在13q31和1q21-q27。(5)构建pDsRed-motilin和pEGFP-ghrelin的真核载体并在IBRS2细胞中表达。(6)在IBRS2细胞中,胰岛素可抵消胰高血糖素对Ghrelin基因转录的上调作用,P4促进Ghrelin表达并可改善T对ghrelin表达的下降调节;胰岛素下调Glut4基因表达,而这种作用可被胰高血糖素部分抵消。
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