骨骼肌生长发育与再生修复机制一直是动物遗传育种和医学领域研究的热点之一,解析其分子机理,对研究肌肉的生长发育规律具有非常重要的意义。Proliferin(PLF)属于催乳素/生长激素超家族,能够调控血管生成,促进内皮细胞和毛囊角质细胞的迁移,对肿瘤细胞的增殖具有正调控作用,然而其对肌源细胞的作用尚未见报道。本研究以小鼠成肌细胞C2C12和小鼠卫星细胞为对象,研究PLF的表达模式及其调控规律,以期能够初步阐述PLF对成肌细胞增殖和分化调控的机理,为深入研究骨骼肌生长发育规律奠定基础。论文的主要结果如下:(1)鉴定了PLF在C2C12细胞中的时空表达规律,并确证了家族中的一个基因Prl2c2起主导作用。通过RT-PCR和Q-PCR实验检测,结果表明PLF在C2C12细胞增殖期的表达量极显著高于分化期(p<0.01);酶切分型和单克隆测序的结果表明,PLF家族中的一个基因Prl2c2起主导作用。(2)在成肌细胞C2C12中鉴定了PLF促进增殖抑制分化的生物学特征。si-PLF转染细胞,流式分析细胞周期,发现细胞在G0/G1期的比例极显著增加(p<0.01),S期极显著下降(p<0.01);x CELLigence监测系统分析表明,转染si-PLF后,细胞的生长速度下降;si-PLF转染细胞,Ed U染色后流式分析表明,Ed U阳性率极显著降低(p<0.01)。细胞转染si-PLF后诱导分化,Q-PCR检测表明肌肉分化标记基因Myo G的表达量显著上调(p<0.05)。(3)在C2C12细胞中,PLF通过调控MAPK和Wnt信号通路中相关基因的表达量,从而发挥促增殖的作用。(4)通过si RNA和Q-PCR进一步确证了与PLF相互作用的基因网络。通过Q-PCR实验检测,C2C12细胞转染si-PLF后,Xirp1,Rrm2b,Ywhaz和Pole4 m RNA的表达量极显著下降(p<0.01),Ttn m RNA的表达量显著下降(p<0.05)。(5)鉴定了PLF对小鼠卫星细胞的时空表达规律。通过RT-PCR实验,发现PLF在小鼠卫星细胞增殖期的表达量显著高于分化时期(p<0.05)。综上所述,PLF具有促进成肌细胞和卫星细胞增殖,抑制其分化的生物学特征,同时,通过MAPK和Wnt信号转导通路下调相关基因的表达,从而对骨骼肌的生长发育发挥重要的调控作用。研究结果对初步阐明PLF对肌源细胞的功能提供了理论基础。