【摘 要】
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猪卵母细胞冻存技术处于不断优化的状态,由于其结构的独特性,冻融过程中渗透压等的变化均会对卵母细胞膜及细胞器造成一定程度的损伤,为了检测CLC及LDL对冻融后猪卵母细胞线
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猪卵母细胞冻存技术处于不断优化的状态,由于其结构的独特性,冻融过程中渗透压等的变化均会对卵母细胞膜及细胞器造成一定程度的损伤,为了检测CLC及LDL对冻融后猪卵母细胞线粒体膜电位及ZP泛素化水平的影响,本研究应用玻璃化冷冻及缓慢冷冻两种方法,分别比较添加两种不同浓度的冷冻载体LDL及CLC后卵母细胞的线粒体膜电位差异,并分析玻璃化冷冻后MⅡ期卵母细胞的透明带泛素化程度。试验主要采用SDS-PAGE以及Western blot方法对不同处理组的猪卵母细胞透明带蛋白样品进行分析,并用线粒体膜电位特异探针JC-1标记各处理组线粒体膜电位,采用荧光显微镜观察红、绿荧光强度和分布情况,为寻找更好的卵母细胞冻融方法并使之更好地应用于生产实践提供理论支持。试验得到以下结果：1.玻璃化冷冻和缓慢冷冻方法冻融GV期卵母细胞后,LDL及CLC处理组存活率分别74.84%,55.26%以及69.86%,44.53%,玻璃化冷冻猪MⅡ期卵母细胞解冻后添加不同浓度CLC处理组的细胞存活率均高于LDL冷冻处理组；添加10%CLC冻融处理组的细胞存活率显著高于其他处理组,与新鲜组无显著差异(P>0.05)2.冷冻保护剂中添加不同浓度的CLC和LDL(1%,10%,20%)处理组在冷冻解冻后培养,MⅡ期卵母细胞透明带蛋白免疫印迹结果分别显示在63 kDa,82 kDa,110 kDa处以及61 kDa,80 kDa,106 kDa处发生不同程度的泛素化标记,且泛素化条带灰度值差异显著,表明猪卵母细胞体外成熟培养过程中透明带蛋白均发生不同程度的泛素化；3.线粒体膜电位特异探针JC-1标记各玻璃化冷冻处理组,10%CLC处理组的△ψm均高于其他冷冻处理组,与新鲜组相比无显著差异(P>0.05)。
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